[发明专利]一种从酸蜂蜜中分离乳酸菌的方法

说明书

本发明公开了一种从酸蜂蜜中分离乳酸菌的方法，包括以下步骤：S1、将酸蜂蜜进行稀释处理获得菌液；S2、将步骤S1获得的菌液接种于乳酸菌液体培养基中，进行多轮驯化培养，获得待分离菌液，其中，驯化培养为：于34‑37℃条件下进行震荡培养；S3、将步骤S2获得的待分离菌液经稀释后，涂布于含有CaCO₃的乳酸菌分离固体培养基上，进行倒置培养。本发明通过一种特殊驯化方法成功本从酸蜂蜜中提取出乳酸菌，该菌株是有益菌，可广泛应用到食品及人体中。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种从酸蜂蜜中分离乳酸菌的方法。

背景技术

酸蜂属于无刺蜂属，因所产的蜂蜜甜中带酸而得名酸蜂，酸蜂蜜是由无刺蜂种里面的酸蜂采集花粉与花蜜酿制加工成的天然蜂蜜，酸蜂一般优先采集药用价值高的植物花蜜，因而具有较高的保健价值，一般认为具有化积消食，延缓衰老，解毒安神及美容抗皱等功效。

酸蜂蜜的原蜜中微生物的种类丰富，主要包括酵母菌，乳酸菌，芽孢杆菌和红曲霉等，其中乳杆菌属是最常被用作益生菌微生物类群，它为革兰氏阳性菌(G+)，不产生芽孢，细胞形态多呈链杆状或球杆状，多数为兼性厌氧菌，其主要发酵产物为乳酸，也有少数副产物，如钾酸、乙酸、琥珀酸、CO₂等。常用于乳制品、肉制品、泡菜等的发酵中，且是人与其它动物呼吸道、胃肠道和泌尿生殖道微生物群落的重要组成部分，乳酸菌还具有调节微生态平衡、增强肠屏障功能和调节免疫反应等有效效果。传统的菌种分离方法工作量非常大且速度缓慢。

因此，开发一种快速从酸蜂蜜提取乳酸菌的方法是非常必要且有积极意义的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从酸蜂蜜中分离乳酸菌的方法，以实现从酸蜂蜜中成功分离出乳酸菌，且具有效率高和准确性高的优点。

本发明通过下述技术方案实现：

一种从酸蜂蜜中分离乳酸菌的方法，包括以下步骤：

S1、将酸蜂蜜进行稀释处理获得菌液；

S2、将步骤S1获得的菌液接种于乳酸菌液体培养基中，进行多轮驯化培养，获得待分离菌液，其中，驯化培养为：于34-37℃条件下进行震荡培养；

S3、将步骤S2获得的待分离菌液经稀释后，涂布于含有CaCO₃的乳酸菌分离固体培养基上，进行倒置培养。

常规分离乳酸菌的方法在步骤S1(稀释)之后，直接把混合菌液利用平板分离乳酸菌，效率非常低。

酸蜂蜜中的乳酸菌浓度含量较高，直接分离很难得到单个菌落，因此，本发明的步骤S1进行稀释处理，使分离后能够获得单个菌落。

如果直接将稀释后的酸蜂蜜进行步骤S3的倒置培养，由于酸蜂蜜的p H在2到4之间，酸度高，直接涂布于含有CaCO₃的乳酸菌分离固体培养基上，会直接水解CaCO₃，无法判断哪些菌落产酸，很难直接经过步骤S3从酸蜂蜜中分离出乳酸菌。

申请人通过试验发现：

先将稀释后的酸蜂蜜进行本发明步骤S2的多轮驯化培养，再进行骤S3的倒置培养，能够成功从酸蜂蜜中分离出乳酸菌，经过本发明步骤S2的多轮驯化培养后的菌液酸度已被充分降低，使乳酸菌的分离效果更佳。

综上，本发明通过利用乳酸菌专用培养基MRS进行多轮驯化培养(8-12轮)，使得混合菌液中的乳酸菌成为优势菌，大大提高了分离的速度和准确性。

进一步地，步骤S1中，采用生理盐水进行稀释。

进一步地，步骤S1中，酸蜂蜜的具体稀释过程为：