[发明专利]一种区分不同基原凌霄花药材的色谱方法

权利要求书

1.一种区分不同基原凌霄花药材的色谱方法，其特征在于：包括下述步骤：

1)供试品溶液的制备：取供试品粉末加入甲醇溶液溶解，加热回流冷却后通过甲醇溶液补足定量，摇匀过滤后取续滤液，获得供试品溶液；

2)参照物溶液的制备：取凌霄花对照药材加水溶解，加热回流冷却，摇匀过滤后取续滤液作为对照药材参照物溶液；取毛蕊花糖苷对照品、异毛蕊花糖苷对照品、肉苁蓉苷F对照品、木犀草素-7-O-二葡萄糖苷酸对照品、芹菜素-7-O-二葡萄糖苷酸对照品，加甲醇溶液溶解后制作对照品参照物溶液；

3)色谱方法的建立：取美洲凌霄与凌霄药材粉末，通过步骤1)方法制备获得美洲凌霄供试品溶液与凌霄供试品溶液，取步骤2)获得的对照药材参照物溶液、对照品参照物溶液、美洲凌霄供试品溶液与凌霄供试品溶液分别注入超高效液相色谱仪，测定得到不同基原凌霄花药材的UPLC特征图谱；

4)凌霄花药材对照指纹图谱制定：取美洲凌霄供试品溶液与凌霄供试品溶液若干批，采用超高效液相色谱法，分别建立美洲凌霄与凌霄的特征图谱，对相应特征峰进行质谱指认及对照品确认；

5)不同基原凌霄花药材鉴别：美洲凌霄有8个共有峰，凌霄有6个共有峰，二者重合的共有峰为：峰1肉苁蓉苷F、峰3campneoside II、峰4campneoside II异构体、峰6毛蕊花糖苷和峰7异毛蕊花糖苷；与美洲凌霄相比，凌霄缺失峰5芹菜素-7-O-二葡萄糖醛苷酸，凌霄增加一个峰A，经质谱指认为野黄芩素-7-O-二葡萄糖醛苷酸；通过峰5的有无可区分凌霄花两基原，完成对美洲凌霄药材与凌霄药材的区分。

2.根据权利要求1所述的区分不同基原凌霄花药材的色谱方法，其特征在于：所述的步骤1)中供试品粉末置于具塞锥形瓶中，每克供试品粉末对应加入22ml～28ml的65％～75％的甲醇溶液进行溶解。

3.根据权利要求1所述的区分不同基原凌霄花药材的色谱方法，其特征在于：所述的步骤1)中加热回流时间为1.4小时～1.6小时。

4.根据权利要求1所述的区分不同基原凌霄花药材的色谱方法，其特征在于：所述的步骤2)中每克凌霄花对照药材对应加入22ml～28ml的水进行溶解。

5.根据权利要求1所述的区分不同基原凌霄花药材的色谱方法，其特征在于：所述的步骤2)中每1ml对照品溶液对应含有140μg～160μg毛蕊花糖苷、100μg～120μg异毛蕊花糖苷、25μg～35μg肉苁蓉苷F、35μg～45μg木犀草素-7-O-二葡萄糖苷酸和35μg～45μg芹菜素-7-O-二葡萄糖苷酸。

6.根据权利要求1所述的区分不同基原凌霄花药材的色谱方法，其特征在于：所述的步骤3)中制备美洲凌霄供试品溶液与凌霄供试品溶液时，提取溶剂为甲醇、70％甲醇、50％甲醇、30％甲醇或者水，提取时间为15min、30min或者45min，提取方式为超声处理、振摇提取或者加热回流，提取体积为15ml、25ml或者50ml。

7.根据权利要求1所述的区分不同基原凌霄花药材的色谱方法，其特征在于：所述的步骤3)或步骤4)中超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：采用Eclipse Plus C18RRHD(2.1mm×100mm，1.8μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，以0.1％冰醋酸溶液为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.25ml/min～0.35ml/min，柱温为25℃～35℃，检测波长为210nm～400nm，进样量0.5μl/min～1.5μl/min。

8.根据权利要求7所述的区分不同基原凌霄花药材的色谱方法，其特征在于：所述的梯度洗脱条件为：0～2min时，流动相A的体积分数为5％→11％，流动相B的体积分数为95％→89％；2min～4min时，流动相A的体积分数变化为11％→13％，流动相B的体积分数变化为89％→87％；4min～16min时，流动相A的体积分数为13％→18％，流动相B的体积分数为87％→82％；16min～21min时，流动相A的体积分数变化为18％→40％，流动相B的体积分数变化为82％→60％；21min～24min时，流动相A的体积分数为40％→60％，流动相B的体积分数为60％→40％；24min～25min时，流动相A的体积分数变化为60％→5％，流动相B的体积分数变化为40％→95％。