[发明专利]一种制备11α,17α-羟基黄体酮的方法

说明书

本发明提供了一种制备11α,17α‑羟基黄体酮的方法，属于生物合成技术领域。本发明提供的一种制备11α,17α‑羟基黄体酮的方法，包括如下步骤：(1)将赭曲霉孢子悬液接种于种子培养基中，在26～28℃下培养20～30h，得到赭曲霉种子液；(2)将赭曲霉种子液按照8～12v/v％的接种量接种于发酵培养基中，在28～30℃下培养，培养期间每隔3～5h进行一次超声处理，培养16～20h后，得到发酵液；(3)在所述发酵液中加入17α‑羟基黄体酮，继续发酵60～80h即可。本发明通过调整赭曲霉所处培养基的渗透压和辅以超声处理提高了赭曲霉对11α,17α‑羟基黄体酮的生产效率。

技术领域

本发明涉及生物合成技术领域，尤其涉及一种制备11α,17α-羟基黄体酮的方法。

背景技术

11α,17α-羟基黄体酮是合成甾体类药物醋酸泼尼松龙的重要中间体。11α,17α-羟基黄体酮的制备是以17α-羟基黄体酮为底物，通过霉菌发酵获得。但由于17α-羟基黄体酮极低的水溶性，霉菌摄取困难，导致霉菌发酵生产11α,17α-羟基黄体酮的效率较低。

目前，主要是通过在霉菌发酵液中加入助溶剂的方式，增加17α-羟基黄体酮的溶解性，提高生产效率。但是添加助溶剂不可避免的引入外源杂质，且助溶剂的成分可能对霉菌细胞或羟基化酶产生抑制作用，从而降低霉菌的生产能力，影响11α,17α-羟基黄体酮的生产效率。因此，有必要提供一种新的制备11α,17α-羟基黄体酮的方法，提高霉菌的生产11α,17α-羟基黄体酮的能力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备11α,17α-羟基黄体酮的方法，提高赭曲霉生产11α,17α-羟基黄体酮的能力。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种制备11α,17α-羟基黄体酮的方法，包括如下步骤：

(1)将赭曲霉孢子悬液接种于种子培养基中，在26～28℃下培养20～30h，得到赭曲霉种子液；

(2)将赭曲霉种子液按照8～12v/v％的接种量接种于发酵培养基中，在28～30℃下培养，培养期间每隔3～5h进行一次超声处理，培养16～20h后，得到发酵液；

(3)在所述发酵液中加入17α-羟基黄体酮，继续发酵60～80h即可。

优选的，所述种子培养基包括如下浓度的组分：葡萄糖15～25g/L、玉米浆20～30g/L、酵母膏10～30g/L、蛋白胨20～40g/L、NaCl 0.2～0.4mol/L，pH＝6.0～7.0。

优选的，所述发酵培养基包括如下浓度的组分：葡萄糖20～40g/L、玉米浆20～30g/L、酵母膏10～30g/L、蛋白胨20～40g/L、NaCl 0.5～0.7mol/L，pH＝6.0～7.0。

优选的，所述超声处理的频率为0.5～1MHz，声强为0.1～1.0W/cm²，时间为5～15min。

优选的，所述17α-羟基黄体酮加入发酵液后的浓度为40～50g/L。

本发明提供了一种制备11α,17α-羟基黄体酮的方法，本发明通过调整赭曲霉所处培养基的渗透压和辅以超声处理改变赭曲霉菌细胞膜的通透性，增加了对17α-羟基黄体酮底物的摄入能力，提高了对17α-羟基黄体酮的转化率，最终提高了11α,17α-羟基黄体酮的生产效率。本发明能够将11α,17α-羟基黄体酮底物的浓度提高到50g/L，转化率保持在96％左右。

具体实施方式

本发明提供了一种制备11α,17α-羟基黄体酮的方法，包括如下步骤：

(1)将赭曲霉孢子悬液接种于种子培养基中，在26～28℃下培养20～30h，得到赭曲霉种子液；