[发明专利]含美洲大蠊提取物的口腔清洁护理品中氨基酸的检测方法

权利要求书

1.含美洲大蠊提取物的口腔清洁护理品中游离氨基酸的检测方法，其特征在于，方法步骤如下：

(1)取含美洲大蠊提取物的口腔清洁护理品试样和萃取剂，试样和萃取剂的质量比为1:2～1:50，同时加入试样质量2～40％的无机盐，依序通过涡旋、超声、离心方式对试样进行辅助萃取；所述萃取剂为体积浓度25～100％的甲醇-水溶液、体积浓度25～100％的乙醇-水溶液、体积浓度25～100％的乙腈-水溶液、100％去离子水中的一种；所述无机盐为硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、氯化钾、碳酸钠中的一种；

(2)收集萃取后的上清液，在50～100℃条件下进行浓缩复溶；

(3)向浓缩复溶溶液中加入浓缩复溶溶液质量0.2～1.0％的碱性乙腈溶液和浓缩复溶溶液质量0.2～1.0％的衍生试剂异硫氰酸苯酯进行涡旋混合，在碱性条件下于20～50℃反应5～240min，得到衍生化溶液；所述碱性乙腈溶液是指含氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钡、三乙醇胺中任一种的乙腈溶液；

(4)用有机溶剂对衍生化溶液进行反萃取，去除过量的衍生试剂异硫氰酸苯酯；所述有机溶剂为环己烷、正己烷、庚烷、己烷、戊烷中的一种；

(5)将反萃取后的溶液离心，弃去上层液，取下层液，采用高效液相色谱法，在梯度洗脱条件下进样检测254nm处的峰面积，通过保留时间定性、外标一点法定量。

2.根据权利要求1所述的含美洲大蠊提取物的口腔清洁护理品中游离氨基酸的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱条件如下：

a.色谱柱：氨基酸专用C18色谱柱或其他等效色谱柱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

b.流动相A：0.1mol/L且pH值6.5的乙酸钠溶液：乙腈(v/v)＝93.0:7.0；

流动相B：乙腈：水(v/v)＝80.0:20.0；

c.流速：1mL/min；

d.检测波长：254nm；

e.柱温：40℃；

f.进样量：5μL；

梯度洗脱进样过程如下：

在第0.01分钟时，流动相A进样100％，流动相B进样0；

在第11分钟时，流动相A进样93.0％，流动相B进样7.0％；

在第13.9分钟时，流动相A进样88.0％，流动相B进样12.0％；

在第14分钟时，流动相A进样85.0％，流动相B进样15.0％；

在第29分钟时，流动相A进样66.0％，流动相B进样34.0％；

在第32分钟时，流动相A进样30.0％，流动相B进样70.0％；

在第35分钟时，流动相A进样0％，流动相B进样100.0％；

在第42分钟时，流动相A进样0％，流动相B进样100.0％；

在第45分钟时，流动相A进样100.0％，流动相B进样0％；

在第60分钟时，流动相A进样100.0％，流动相B进样0％。

3.根据权利要求1或2所述的含美洲大蠊提取物的口腔清洁护理品中游离氨基酸的检测方法，其特征在于，上述步骤(1)中，所述涡旋方式的旋涡转速为200～3000rpm，旋涡时间1～20min；所述超声方式的超声波频率10～60Hz，超声时间1～50min；所述离心方式的离心转速为500～100000rpm,离心时间1～20min；辅助萃取次数为1～5次。

4.根据权利要求1或2所述的含美洲大蠊提取物的口腔清洁护理品中游离氨基酸的检测方法，其特征在于，所述浓缩复溶，是将上清液倒入蒸发皿中重复萃取一次，然后蒸干，冷却至室温，再加入甲醇复溶。