[发明专利]一种肝素结合蛋白的量子点荧光检测方法及应用

说明书

本发明提供一种肝素结合蛋白的量子点荧光检测方法及应用，属于分析化学和检测技术领域。本发明基于量子点免疫荧光法，取受检人群的血清、血浆或全血作为待检样本，经样本稀释液前处理和检测过程优化，基于量子点的免疫层析试纸条，从而实现对肝素结合蛋白（HBP）的快速、准确和宽范围检测，因此具有良好的实际应用之价值。

技术领域

本发明属于分析化学和检测技术领域，具体涉及一种肝素结合蛋白的量子点荧光检测方法及应用。

背景技术

本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

感染性疾病是一类严重威胁人类健康的疾病，其初期症状缺乏特异性，往往会导致诊断延误，是导致危重症患者死亡的主要原因。因此，对感染性疾病的早期识别至关重要。肝素结合蛋白（heparin-binding protein，HBP）是一种新型感染标志物。《中国严重脓毒症/脓毒性休克治疗指南（2014）》指出，HBP可作为脓毒症，特别是严重细菌感染的早期诊断标志物。

肝素结合蛋白（HBP）是胰蛋白酶样丝氨酸蛋白家族的一员，具有杀菌活性且带正电荷，主要在中性粒细胞的细胞质中产生。HBP主要沉淀于内皮细胞中，可诱导内皮渗透增加，激活单核细胞沿着内皮滚动，发挥对炎症反应和血管渗漏的调节作用。HBP对内毒素脂质A成分具有较强的亲和力，可与内毒素结合。HBP与肝素也有很强的亲和力，两者结合后，其活性会被抑制。HBP受各种细胞因子、炎性因子、趋化因子和细菌刺激后释放，也可由单核细胞少量释放。HBP参与炎性反应、趋化作用，有抗菌作用，可促进血管通透性，又称天青素或37000阳离子抗菌蛋白（CAP37）。

HBP在中性粒细胞成熟过程中已经被合成，一部分储存于嗜天青颗粒和分泌囊泡中，极少部分存在于白细胞膜的β₂整合素中，健康人血液中HBP水平一般不超过10ng/mL。当机体受到细菌感染后，部分细菌侵入到血管内，菌体本身或者细菌释放的毒素等物质刺激中细粒细包释放HBP从而导致血中HBP含量升高，HBP在一般感染时能达到20-30ng/ml，ICU中严重感染会更高达100-1000ng/ml，病危患者甚至可能超过1000ng/ml。因此，HBP可以在血液和组织中释放，对各种细胞产生相应的作用。

HBP的主要作用机制有以下几点：（1）调节血管内皮细胞功能，影响血管通透性及炎性反应；（2）调节单核-巨噬细胞功能，促进其激活及相关炎性反应的扩大；（3）通过线粒体途径调节细胞凋亡。鉴于HBP参与激活白细胞、增加毛细血管通透性及使有效循环血容量减少等多种脓毒症的病理、生理过程，因此HBP在脓毒症的研究中越来越受到关注。

传统炎症标志物较多，临床上最常用的有白细胞计数（WBC）、CRP、白细胞介素-6（IL-6）、PCT和血清淀粉样蛋白A（SAA）等，上述指标在感染性疾病的诊断、治疗及预后方面均具有一定的应用价值，但其诊断灵敏度和特异性相差较大。WBC、CRP和IL-6等诊断感染性疾病的特异性较低。PCT和SAA特异性较高，可用于诊断脓毒症及评判脓毒症的严重程度，但其早期诊断价值较低，且PCT不能有效区分是细菌感染还是非细菌感染所引起的全身炎症反应综合征。与PCT相比，HBP可以更早地预测脓毒症，且与疾病的严重程度呈正相关，因此，HBP在细菌感染及脓毒症的诊断上是优于传统标志物的。

目前HBP的检测方法主要包括免疫比浊法、酶联免疫吸附法(ELISA)、磁微粒化学发光法、胶体金法等。其中免疫比浊和ELISA法的操作时间长，检测范围受方法学限制；磁微粒化学发光法需要配备全自动仪器，检测地点收到限制，且检测时间较长；而胶体金法的检出限高、无法准确定量，且靠肉眼观察容易出现误判，因此在临床上的使用均比较受限。

发明内容