[发明专利]一种肝素结合蛋白的量子点荧光检测方法及应用

权利要求书

1.一种肝素结合蛋白的检测方法，其特征在于，所述检测方法具体包括：

S1、将待测样品加入样本稀释液中进行稀释并预处理；

S2、将上述待测物加入基于量子点的免疫层析试纸条上，对显色完成的试纸条进行荧光检测；

其中，所述样本稀释液由含有0.1%EDTA、1% PEG8000、1%PVA、0.5%Tween20的0.1MTris-HCl缓冲液构成；

所述待测样品为血清、血浆或全血；

所述基于量子点的免疫层析试纸条包括底板，所述底板上依次设置有滤血膜、结合垫、检测垫和吸水垫，相邻各垫在连接处交叠连接；

所述结合垫含有冻干液为：0.1%甘露醇，1%谷氨酸钠，1.5%甘氨酸，0.5%S9，1.5%羟丙基-β-环糊精和5%海藻糖的0.1 M Tris-HCl体系；

所述滤血膜经预处理液浸泡处理冻干后获得；

所述预处理液为含有5.0%海藻糖、1%S9、0.05%抗红细胞抗体和0.2%阻断剂的0.1MTris-HCl缓冲液；

所述阻断剂为非特异性的鼠、兔、羊、牛来源的IgG或者抗血清；

所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上依次设置标记物线、检测线和质控线；

所述检测线上包被有划线缓冲液稀释的HBP检测线抗体，所述质控线上包被有划线缓冲液稀释的羊抗鸡IgY，检测垫采用冷冻干燥方式进行干燥后获得；

其中，所述划线缓冲液其为0.01M-0.03M Tris-HCl缓冲液体系，含有3%-5%甲醇以及0.2%-0.5%Tween-20；

所述结合垫上包被有量子点标记肝素结合蛋白抗体和量子点标记鸡IgY抗体的混合物；

所述量子点标记肝素结合蛋白抗体和量子点标记鸡IgY抗体的质量比为0.5-2:1；

肝素结合蛋白抗体为单克隆抗体；

所述吸水垫为吸水纸，所述底板采用PVC板。

2.一种肝素结合蛋白的量子点荧光检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒至少包含免疫层析试纸条或检测卡；

所述免疫层析试纸条，其采用如下方法制备得到：

S1、制备检测线与质控线区域的包被膜：取NC膜和PVC板，将NC膜非点样面贴于PVC板的既定位置，取肝素结合蛋白抗体以及羊抗鸡IgY，划膜包被于NC膜的检测线和质控线位置，干燥后即得；

S2、制备结合垫：

a：取硒化镉量子点，加入到MES、MOPS或HEPES缓冲液中，活化处理；

b：取步骤a制备的量子点标记液，向其中依次加入EDC和NHS，再加入肝素结合蛋白抗体进行避光反应；

c：取步骤b中的标记后混合液离心，并用硼酸盐缓冲液作为洗脱液进行洗脱；

d：收集步骤c中得到内管中液体，混匀并超声，即得到量子点标记的肝素结合蛋白抗体；

e：按照上述步骤a~d同样的方法制备量子点标记鸡IgY抗体；然后将两种标记抗体与冻干液混匀后制成结合垫包被液，喷涂于结合垫上，冷冻干燥后即得；

所述冻干液采用0.1 M Tris-HCl体系，并向其中添加0.1%甘露醇，1%谷氨酸钠，1.5%甘氨酸，0.5%S9，1.5%羟丙基-β-环糊精和5%%海藻糖；

所述量子点标记HBP抗体、量子点标记鸡IgY抗体与冻干液的质量比为0.5-2：0.5-2：6；

S3、制备滤血膜；

a：配制滤血膜的预处理液；

b：将滤血膜裁切后，应用预处理液进行浸泡或涂布预处理；

c：冷冻干燥后即得；

所述预处理液为含有5.0%海藻糖、1%S9、0.05%抗红细胞抗体和0.2%阻断剂的0.1MTris-HCl缓冲液；

所述阻断剂为非特异性的鼠、兔、羊、牛来源的IgG或者抗血清；

S4、组装：

将底板上对应位置的粘纸撕去，将吸水纸粘贴在包被膜的NC膜上方，将结合垫粘贴在包被膜的NC膜下方；将滤血膜粘贴在结合垫下方并部分覆盖结合垫，即可得到组装好的大板；

S5、切条装壳：设置试纸条宽度后，进行裁切，即为制备好的试纸条；

将试纸条正向放入检测卡壳中，压壳封装好，即得到单人份肝素结合蛋白检测卡；

所述检测试剂盒还包括样本稀释液；

其中，所述样本稀释液由含有0.1%EDTA、1% PEG8000、1PVA、0.5%Tween20的0.1M Tris-HCl缓冲液。

3.权利要求1所述检测方法或权利要求2所述试剂盒在肝素结合蛋白检测中的应用。