[发明专利]生物样本中硫化氢的检测方法及其应用

说明书

本发明提供了一种生物样本中硫化氢的检测方法及其应用，涉及硫化氢检测的技术领域。该检测方法包括对样本进行前处理，使样本中的硫化氢反应生成亚甲基蓝，然后采用LC‑MS检测样本中的亚甲基蓝，将LC‑MS检测获得的亚甲基蓝检测值带入标准曲线中，计算得到亚甲基蓝对应的硫化氢的含量；前处理包括使用氢氧化锌悬浊液与样本中的硫化氢反应，得到含有硫化锌的沉淀，然后在酸性介质中和三价铁离子存在的条件下，与N,N‑二甲基对苯二胺反应，生成亚甲基蓝。该检测方法具有准确度和灵敏度高，和检测速度快的优点。

技术领域

本发明涉及硫化氢检测技术领域，尤其是涉及一种生物样本中硫化氢的检测方法及其应用。

背景技术

硫化氢(hydrogen sulfide，硫化氢)是一种无机化合物，是一种无色的水溶性气体，并且有臭鸡蛋的味道。硫化氢是继一氧化氮NO和一氧化碳CO之后的第三种重要的内源性气体信号分子，硫化氢参与很多生理病理过程，现在已经有相关研究发现硫化氢在心血管系统，神经系统，消化系统，内分泌系统以及免疫系统等系统中有较为广泛的分布，参与许多生理和疾病的病理生理过程。有文献报道，硫化氢与骨代谢以及骨质疏松等骨疾病中也参与了重要的调控作用，硫化氢有望成为骨代谢以及骨相关疾病研究的新靶点，但是现在缺乏较为准确的方法来测量血清中硫化氢的含量。

目前，国内外硫化氢常用的检测方法有气相色谱法；电极法以及亚甲基蓝分光光度法。至今为止，气相色谱的方法优点是检测血清硫化氢含量的金标准，虽然气相色谱的敏感性高，特异性好，但是气象色谱的方法缺点是对于检测器，标准气和取样的技术都有较高的要求，气象色谱设备的要求较高，并且检测仪器较为昂贵，检测的时间也比较长，所以一般不作为临床与科研实验的推广。而电极法是通过强碱对样品的蛋白质结构进行破坏，然后通过检测S^2-而实现样品中硫化氢的含量，但是电极法对于样品量的需求量大，重复性也不太好，所以也没有将电极法广泛推广。亚甲基蓝分光光度法操作标记简单，所需要的试剂相对低廉，所用的检测时间也比较短，所需仪器也比较常见，但是分光光度法的敏感性较差，只有超过10μmol/L的硫化氢才能够利用分光光度计的方法被检测的到。因此，如何改进内源性硫化氢的检测方法，以提高硫化氢检测的准确度和灵敏度，是目前有待解决的问题。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种生物样本中硫化氢的检测方法，该方法具有检测速度快且准确度和灵敏度高的优点，缓解了现有技术存在的内源性硫化氢的检测方法准确度和灵敏度不足的技术问题。

本发明的第二目的在于提供一种上述生物样本中硫化氢的检测方法在制备用于治疗骨相关疾病的药品中的应用。

为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种生物样本中硫化氢的检测方法，所述检测方法包括对样本进行前处理，使样本中的硫化氢反应生成亚甲基蓝，然后采用LC-MS检测样本中的亚甲基蓝，将LC-MS检测获得的亚甲基蓝检测值带入标准曲线中，计算得到亚甲基蓝对应的硫化氢的含量；

所述前处理包括使用提取试剂与样本中的硫化氢反应，得到含有硫化锌的沉淀，然后在酸性介质中和三价铁离子存在的条件下，与N,N-二甲基对苯二胺反应，生成亚甲基蓝；

所述提取试剂为氢氧化锌悬浊液。

优选地，所述氢氧化锌悬浊液为乙酸锌溶液和氢氧化钠溶液混合后得到的悬浊液；

优选地，乙酸锌溶液的浓度为1～2％w/v；氢氧化钠溶液的浓度为1～2M；乙酸锌溶液和氢氧化钠溶液的体积比为(5～10):1；

优选地，乙酸锌溶液的浓度为1％w/v；氢氧化钠溶液的浓度为1.5M；乙酸锌溶液和氢氧化钠溶液的体积比为7:1。