[发明专利]一种AAV空壳率的液相色谱分析方法在审
| 申请号： | 202211068610.6 | 申请日： | 2022-09-07 |
| 公开（公告）号： | CN115308351A | 公开（公告）日： | 2022-11-08 |
| 发明（设计）人： | 蔡琼;王帅帅 | 申请（专利权）人： | 苏州赛分科技股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/88 | 分类号： | G01N30/88 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 王艳 |
| 地址： | 215125 江苏省苏州*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 aav 空壳 色谱 分析 方法 | ||
1.一种AAV空壳率的液相色谱分析方法，其特征在于，所述分析方法包括以下步骤：
1）阴离子交换色谱柱的选择；所述阴离子交换色谱柱包括填料和基质，所述填料为多孔或无孔的球形颗粒，所述基质包括苯乙烯/二乙烯基苯、二氧化硅、聚甲基丙烯酸酯或琼脂糖中的一种或几种，所述基质表面修饰季铵基基团；
2）色谱条件的设置并进行上样和洗脱：使用外置柱温箱，温度为10℃-80℃，流动相以低浓度缓冲液进行AAV样品上样，再用高浓度洗脱盐洗脱；
3）检测：采用UV检测器和荧光检测器对AAV空壳率进行分析。
2.根据权利要求1所述的AAV空壳率的液相色谱分析方法，其特征在于，步骤1）中所述色谱柱的内径为2.0-10mm，色谱柱的柱长为30-600mm。
3.根据权利要求1所述的AAV空壳率的液相色谱分析方法，其特征在于，步骤1）中所述球形颗粒的孔径大小为0Å-2000Å，粒径大小为1.7μm-30μm。
4.根据权利要求1所述的AAV空壳率的液相色谱分析方法，其特征在于，步骤1）中所述阴离子交换色谱柱为Sepax Proteomix POR-Q 或Sepax Proteomix SAX。
5.根据权利要求1所述的AAV空壳率的液相色谱分析方法，其特征在于，步骤2）中所述流动相的流速为100~600cm/h。
6.根据权利要求1所述的AAV空壳率的液相色谱分析方法，其特征在于，步骤2）中所述低浓度缓冲液包括Bis-Tris 丙烷缓冲盐、磷酸缓冲盐、Bis-Tris缓冲盐、Tris缓冲盐、三乙醇胺缓冲盐、MOPS缓冲盐或HEPES缓冲盐中的一种，所述高浓度洗脱盐包括TMAC、NaCl、KCl、LiCl、NaClO4、NaCO3、NaBr或者CH3COONH4中的一种。
7.根据权利要求1所述的AAV空壳率的液相色谱分析方法，其特征在于，步骤2）中流动相的pH为8.0~10.0。
8.根据权利要求1所述的AAV空壳率的液相色谱分析方法，其特征在于，步骤2）中所述低浓度缓冲液浓度为0.01-0.2mol/L，所述高浓度洗脱盐浓度为0.1-2mol/L。
9.根据权利要求1所述的AAV空壳率的液相色谱分析方法，其特征在于，步骤2）中AAV样品为AAV5血清型样品或AAV8血清型样品。
10.根据权利要求1所述的AAV空壳率的液相色谱分析方法，其特征在于，步骤3）中采用UV检测器检测时波长为280nm或260nm；采用荧光检测器检测时波长为：Ex=280nm，Em=330nm。
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