[发明专利]抗细胞角蛋白18抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开一种抗细胞角蛋白18抗体及其制备方法和应用。其中抗细胞角蛋白18抗体或其抗原结合片段具有SEQ ID NO.:1‑6所示氨基酸序列的重链可变区和/或轻链可变区。本发明中的CK18抗体的制备方案使用了原核重组CK18全长抗原，具有较全的CK18优势表位，避免了天然CK18的丝状螺旋结构导致的表位暴露较少的问题。此外，本发明使用的免疫原的免疫原性较强，优势表位暴露较多，因此制备的单克隆抗体亲和力大大提高。同时本发明选取了特定序列的CK18多肽进一步筛选制备得到了抗体，不仅可以避免个体突变差异造成的漏检，还可以避免CK18蛋白的磷酸化修饰造成抗体亲和力降低的问题。

技术领域

本发明涉及生物免疫治疗技术领域，具体地涉及抗细胞角蛋白18抗体及其制备方法和应用。

背景技术

细胞角蛋白(Cytokeratin,CK)是细胞骨架的中间丝蛋白家族中最大、最复杂的亚类，细胞角蛋白18(CK18)属于其中一员，主要分布于上皮细胞，是肝细胞以及其它上皮细胞的主要骨架蛋白。CK18是一种主要表达于成熟上皮细胞的Ⅰ型酸性中间丝蛋白，CK8是其丝状配偶体。近年来随着研究的不断扩展深入，CK18不仅在多个系统的肿瘤的诊断、转移、复发以及预后均有意义，而且在肝脏疾病和重症感染等领域的作用越发被认识以及重视。通过基因重组制备CK18全长重组蛋白，并以此为免疫原制备单克隆抗体，可为检测CK18试剂盒提供核心生物活性原料。

由Carlos Caulín、Guy S.Salvesen和Robert G.Oshima等人在1997年的研究发现，细胞凋亡过程中的结构变化是由半胱天冬酶(Caspase)家族的蛋白酶介导的在细胞凋亡过程中，Ck18 IFs重组为富含磷酸化的颗粒结构。在药物和紫外光诱导的细胞凋亡过程中产生一个蛋白水解片段；该片段与在体外被caspase-6、-3和-7裂解的K18结合。K18被caspase-6切割成NH₂末端、26kd和COOH末端22kd片段；caspase-3和-7还将22kd片段切割成19kd片段。三种半胱天冬氨酸酶的共同裂解位点是序列VEVD/A，位于CK18 L1-2的连接结构区域。例如，中国专利申请CN111269314A中公开了一种抗CK18单克隆抗体的制备和应用方法，所使用的免疫原为CK18表位肽与载体蛋白KLH(钥孔血蓝蛋白)连接制备，此方法制备的单克隆抗体均有较高的表位均一性，但也会丧失很多CK18其他表位。

背景技术中的信息仅仅在于说明本发明的总体背景，不应视为承认或以任何形式暗示这些信息构成本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

为解决现有技术中的技术问题，本发明人通过深入研究，制备、挑选了特有的抗人CK18单克隆抗体序列，并开发了CK18单克隆抗体的体外制备和生产方法。具体地，本发明包括以下内容。

本发明的第一方面，提供一种抗体或其抗原结合片段，其靶向细胞角蛋白18，所述抗体或其抗原结合片段包含：

SEQ ID NO.:1所示的重链氨基酸序列，其中所述重链包含抗原互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的可变区；和/或

SEQ ID NO.:2所示的轻链氨基酸序列，其中所述轻链包含抗原互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的可变区。

本发明的第二方面，提供一种抗体或其抗原结合片段，其靶向细胞角蛋白18，所述抗体或其抗原结合片段包含：

SEQ ID NO.:3所示的重链氨基酸序列，其中所述重链包含抗原互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的可变区；和/或

SEQ ID NO.:4所示的轻链氨基酸序列，其中所述轻链包含抗原互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的可变区。

本发明的第三方面，提供一种抗体或其抗原结合片段，其靶向细胞角蛋白18，所述抗体或其抗原结合片段包含：