[发明专利]一种利用藻菌共生技术削减养猪废水中抗生素抗性基因的方法

权利要求书

1.一种利用藻菌共生技术削减养猪废水中抗生素抗性基因的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1:微藻的驯化处理：将处于对数生长期的微藻，经离心处理后，转移到灭菌的养猪废水中，在恒温、固定光照的条件下培养、驯化；

S2:真菌菌丝球的制备：将真菌孢子接种到盛有灭菌的PDW培养基的锥形瓶中，并将锥形瓶放置于恒温摇床中培养，获得真菌菌丝球；

S3:真菌菌丝球的驯化：将上述制得的真菌菌丝球转移至灭菌的养猪废水中培养、驯化；

S4:藻菌共生体的构建：将上述驯化后的微藻和驯化后的真菌菌丝球按照藻菌干重质量比例为1:5~15:1进行混合，在恒温、固定光照的条件下培养，构建微藻-真菌共生体，摇速为100~180 rmp/min；

S5:将上述得到的藻菌共生体转移到养猪废水中，在恒温、固定光照条件下，净化处理养猪废水，削减废水中抗生素抗性基因的丰度。

2.根据权利要求1所述的利用藻菌共生技术削减养猪废水中抗生素抗性基因的方法，其特征在于，步骤S1中所述的微藻为普通小球藻、斜生四链藻、四尾栅藻、新月藻、衣藻中的一种；所述微藻密度为10⁶~10⁷ cells/mL，驯化前经灭菌无菌水洗涤三次并离心富集。

3.根据权利要求1所述的利用藻菌共生技术削减养猪废水中抗生素抗性基因的方法，其特征在于，步骤S2中所述的真菌为灵芝菌、曲霉菌、平菇中的一种，孢子初始接种浓度为1.0×10⁶ spores·L^-1。

4.根据权利要求1所述的利用藻菌共生技术削减养猪废水中抗生素抗性基因的方法，其特征在于，步骤S2中所述PDW培养基配方为马铃薯浸出粉 6.0g/L，葡萄糖 20.0g/L。

5.根据权利要求1所述的利用藻菌共生技术削减养猪废水中抗生素抗性基因的方法，其特征在于，步骤S2中所述的培养条件为：温度为25~30℃，摇速为100~180 rmp/min。

6.根据权利要求1所述的利用藻菌共生技术削减养猪废水中抗生素抗性基因的方法，其特征在于，步骤S2中获得的真菌菌丝球直径为2~6 mm。

7.根据权利要求1所述的利用藻菌共生技术削减养猪废水中抗生素抗性基因的方法，其特征在于，步骤S3中所述培养温度为30±1℃，驯化周期为3-7天。

8.根据权利要求1所述的利用藻菌共生技术削减养猪废水中抗生素抗性基因的方法，其特征在于，步骤S1、S4、S5中所述的恒温、固定光照条件：温度为22~30℃，光照强度为100~800 µmol·m^-2·s^-1、光暗时间比为8~16 h光照/16~8 h黑暗。

9.根据权利要求1所述的利用藻菌共生技术削减养猪废水中抗生素抗性基因的方法，其特征在于，步骤S5中所述的藻菌共生体用量为50~300 个/100 mL废水。