[发明专利]构建PARK7基因突变的帕金森病模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用

权利要求书

1.PARK7-gRNA2、PARK7-gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用；

所述PARK7-gRNA2为sgRNA，其靶序列结合区如SEQ ID NO：16中第3-22位核苷酸所示；所述PARK7-gRNA4为sgRNA，其靶序列结合区如SEQ ID NO：17中第3-22位核苷酸所示；所述NCN蛋白为Cas9蛋白或具有Cas9蛋白的融合蛋白；

所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组猪细胞；(b)制备帕金森病模型猪；(c)制备帕金森病细胞模型或帕金森病组织模型或帕金森病器官模型。

2.PARK7-gRNA2、PARK7-gRNA4和PRONCN蛋白在制备试剂盒中的应用；

PARK7-gRNA2为权利要求1中所述的PARK7-gRNA2；

PARK7-gRNA4为权利要求1中所述的PARK7-gRNA4；

所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件：信号肽、分子伴侣蛋白、蛋白标签、蛋白酶酶切位点、核定位信号、Cas9蛋白、核定位信号；

所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组猪细胞；(b)制备帕金森病模型猪；(c)制备帕金森病细胞模型或帕金森病组织模型或帕金森病器官模型。

3.PARK7-gRNA2、PARK7-gRNA4和特异质粒在制备试剂盒中的应用；

PARK7-gRNA2为权利要求1中所述的PARK7-gRNA2；

PARK7-gRNA4为权利要求1中所述的PARK7-gRNA4；

所述特异质粒自上游至下游依次包括如下元件：启动子、操纵子、核糖体结合位点、PRONCN蛋白的编码基因、终止子；所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件：信号肽、分子伴侣蛋白、蛋白标签、蛋白酶酶切位点、核定位信号、Cas9蛋白、核定位信号；

所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组猪细胞；(b)制备帕金森病模型猪；(c)制备帕金森病细胞模型或帕金森病组织模型或帕金森病器官模型。

4.一种试剂盒，包括PARK7-gRNA2、PARK7-gRNA4和NCN蛋白；

PARK7-gRNA2为权利要求1中所述的PARK7-gRNA2；PARK7-gRNA4为权利要求1中所述的PARK7-gRNA4；NCN蛋白为权利要求1中所述的NCN蛋白；

所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组猪细胞；(b)制备帕金森病模型猪；(c)制备帕金森病细胞模型或帕金森病组织模型或帕金森病器官模型。

5.一种试剂盒，包括PARK7-gRNA2、PARK7-gRNA4和PRONCN蛋白；

PARK7-gRNA2为权利要求1中所述的PARK7-gRNA2；PARK7-gRNA4为权利要求1中所述的PARK7-gRNA4；PRONCN蛋白为权利要求2中所述的PRONCN蛋白；

所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组猪细胞；(b)制备帕金森病模型猪；(c)制备帕金森病细胞模型或帕金森病组织模型或帕金森病器官模型。

6.一种试剂盒，包括PARK7-gRNA2、PARK7-gRNA4和特异质粒；

PARK7-gRNA2为权利要求1中所述的PARK7-gRNA2；PARK7-gRNA4为权利要求1中所述的PARK7-gRNA4；特异质粒为权利要求3中所述的特异质粒；

所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组猪细胞；(b)制备帕金森病模型猪；(c)制备帕金森病细胞模型或帕金森病组织模型或帕金森病器官模型。

7.一种制备重组猪细胞的方法，包括如下步骤：将PARK7-gRNA2、PARK7-gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组猪细胞；PARK7-gRNA2为权利要求1中所述的PARK7-gRNA2；PARK7-gRNA4为权利要求1中所述的PARK7-gRNA4；NCN蛋白为权利要求1中所述的NCN蛋白。