[发明专利]一种检测MCF-7细胞代谢物中脂肪酸类化合物的方法

说明书

本发明公开了一种检测MCF‑7细胞代谢物中脂肪酸类化合物的方法，对培养状态良好的MCF‑7细胞进行同步化处理，随后采用淬灭剂淬灭细胞，收集细胞；对收集到的细胞进行细胞破碎，获得细胞内源性物质；除去内源性物质中的蛋白质后，用石油醚、二氯甲烷或正己烷作为提取试剂提取得到MCF‑7细胞代谢物；采用气相色谱质谱联用法，检测MCF‑7细胞代谢物中的脂肪酸类化合物。本发明能够检测到多种MCF‑7细胞代谢物中的脂肪酸类化合物，对于细胞内脂肪酸代谢相关研究具有重要意义。

技术领域

本发明涉及代谢组学技术领域，尤其涉及细胞代谢物的提取、检测方法。

背景技术

代谢组学(metabonomics/metabolomics)是对生物体内所有代谢物进行定量或定性分析，并寻找代谢物与生理病理变化的相对关系的研究，是系统生物学的重要组成部分。目前，代谢组学已发展至疾病诊断、医药研制开发、营养食品科学、毒理学、环境学、植物学等与人类健康护理密切相关的领域。细胞内许多生命活动是发生在代谢物层面的，如细胞信号释放、能量传递、细胞间通信等都受到细胞代谢物调控，对细胞代谢物的研究，能够反映细胞所处的环境、细胞的营养状态、药物和环境污染等外界因素对细胞的影响等。

细胞代谢物的提取和检测方法多种多样，主要步骤包括淬灭、采集、细胞破碎、提取、检测。为了获得有用的细胞代谢物，需要采用不同的提取和检测方法对不同的细胞代谢物进行提取和检测。脂肪酸是一类羧基化合物，动物体内脂肪酸是由线粒体内的乙酰辅酶A通过柠檬酸穿梭到细胞质合成的。脂肪酸是人体生命活动的重要物质，其可合成一些代谢的原料。因此，细胞代谢物中脂肪酸类化合物的提取检测具有重要意义。但由于细胞代谢物中含有种类众多、结构迥异的化合物，如何从细胞代谢物中准确检测到某类特定的化合物，目前仍是代谢组学和细胞代谢物研究领域的重点和难点所在。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测MCF-7细胞代谢物中脂肪酸类化合物的方法。本发明对同步化后的MCF-7细胞代谢物进行提取、检测，并获得了一组MCF-7细胞代谢物中脂肪酸类化合物组合。

为了实现上述发明目的，本发明提供的技术方案是：

一种检测MCF-7细胞代谢物中脂肪酸类化合物的方法，包括：

1)培养MCF-7细胞，待细胞状态良好后，对MCF-7细胞进行同步化处理，随后采用淬灭剂淬灭细胞，收集细胞；对收集到的细胞进行细胞破碎，获得细胞内源性物质；除去内源性物质中的蛋白质后，用提取试剂提取得到MCF-7细胞代谢物；所述提取试剂包括石油醚(60℃～90℃)、二氯甲烷或正己烷中的至少一种；

2)采用气相色谱质谱联用法，检测MCF-7细胞代谢物中的脂肪酸类化合物。

进一步地，所述气相色谱质谱联用法中，气相色谱条件为升温程序，初始柱温59～61℃；以9～11℃·min^-1从59～61℃升至158～162℃，保持58～62s；以4～6℃·min^-1从158～162℃升至258～262℃，保持118～122s；以9～11℃·min^-1从258～262℃升至278～282℃，保持178～182s，运行总时长为36～40min。

进一步地，所述气相色谱质谱联用法中，质谱条件为离子源温度228～232℃，质谱四级杆温度148～152℃。

进一步地，MCF-7细胞代谢物中脂肪酸类化合物的总离子流图保留时间为16min～24min。