[发明专利]用于间充质干细胞培养的水凝胶、培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种用于间充质干细胞培养的水凝胶，其特征在于，包括基体组分和交联组分；所述基体组分、交联组分的重量比为110：(0.1～2)；

所述基体组分按重量百分数计包括以下组分：

明胶1～10％，海藻酸钠0.5～5％，γ-聚谷氨酸1～6％，蒸馏水80～95％；

所述交联组分选用转谷氨酰胺酶。

2.如权利要求1所述的用于间充质干细胞培养的水凝胶，其特征在于，所述基体组分按重量百分数计由以下组分组成：

明胶3～7％，海藻酸钠1～3％，γ-聚谷氨酸2～5％，蒸馏水88～93％。

3.如权利要求1或2所述的用于间充质干细胞培养的水凝胶，其特征在于，所述转谷氨酰胺酶为微生物产转谷氨酰胺酶。

4.一种如权利要求1～3任一项所述的用于间充质干细胞培养的水凝胶的制备方法，其特征在于，包括：

(1)将明胶、海藻酸钠、γ-聚谷氨酸与蒸馏水混合均匀，得到第一溶液；

(2)将所述第一溶液、交联组分混合，交联预设时间后得到用于间充质干细胞培养的水凝胶成品。

5.一种用于间充质干细胞培养的培养基，其特征在于，其包括如权利要求1～3任一项所述的用于间充质干细胞培养的水凝胶。

6.如权利要求5所述的用于间充质干细胞培养的培养基，其特征在于，还包括基础培养基、干细胞因子和血清替代物；

所述培养基中，基础培养基为DMEM/F12培养基，干细胞因子的含量为8～15ng/mL，血清替代物的体积浓度为5％～10％，水凝胶的含量为110～170mg/mL。

7.一种如权利要求5或6所述的用于间充质干细胞培养的培养基的制备方法，其特征在于，包括：

(1)将明胶、海藻酸钠、γ-聚谷氨酸与蒸馏水混合均匀，得到第一溶液；

(2)将所述第一溶液、基础培养基、血清替代物、干细胞因子混合均匀，得到3D培养基质；将所述3D培养基质、交联组分单独包装，得到用于间充质干细胞培养的培养基成品。

8.一种间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括采用如权利要求5或6所述的用于间充质干细胞培养的培养基进行培养的步骤。

9.如权利要求8所述的间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括：

(1)将脐带组织用组织清洗液清洗；所述组织清洗液包括生理盐水、硫酸庆大霉素、两性霉素和红细胞裂解液；

(2)分离出清洗后脐带组织中的华通式胶剪碎后加入组织消化液消化，消化后离心，所得沉淀重悬得到脐带间充质干细胞悬液；其中，所述组织消化液包括胶原酶I、DNA酶和Tryple酶；

(3)将所述脐带间充质干细胞悬液加入完全培养基中培养、传代；其中，所述完全培养基中含有庆大霉素、两性霉素B和细胞因子；

(4)将传代培养至P1代的细胞采用如权利要求5或6所述的培养基培养。

10.如权利要求9所述的间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述组织清洗液中，硫酸庆大霉素的浓度为20～30μg/mL，两性霉素B的浓度为1～10μg/mL，红细胞裂解液的体积百分数为1～10％；

所述组织消化液中胶原酶I的含量为0.1～1mg/mL，DNA酶的含量为0.01～0.1mg/mL，Tryple酶体积浓度为30～50％；

所述完全培养基中庆大霉素的含量为0.05～2μg/mL，两性霉素的含量为0.05～5μg/mL，细胞因子的含量为5～15wt％。