[发明专利]一种畜产品中莱克多巴胺的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种畜产品中莱克多巴胺的检测方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将含有生物素标记的RAC核酸适配体和探针储液，经退火后用Tris-HCl缓冲液稀释，再加入经Tris-HCl缓冲液洗涤后的磁珠，孵育后再洗涤，得经修饰的磁珠，用PBS缓冲液重悬得经修饰的磁珠溶液；

（2）AuNPs溶液与Hp探针溶液、Sp探针溶液和PBS缓冲液混合后的混合液经孵育，离心弃上清再用PBS缓冲液重悬，得修饰有Hp-Sp探针的AuNPs溶液；

（3）步骤（1）的磁珠溶液与待测样品溶液和PBS缓冲液混合后经孵育，所得溶液经PBS缓冲液洗涤后加入步骤（2）的修饰有Hp-Sp探针的AuNPs溶液，再孵育，然后用PBS缓冲液清洗后所得固体再用PBS缓冲液重悬，得样品检测液；

（4）向步骤（3）的样品检测液中加入链亲霉素-辣根过氧化物酶，孵育后用PBS缓冲液清洗后再加入含有ABTS和H₂O₂的醋酸盐缓冲溶液，孵育后加入叠氮钠溶液观察颜色变化，并检测414nm处紫外吸光度；

（5）将步骤（4）测得的吸光度值代入吸光度与莱克多巴胺浓度的线性方程，即得畜产品样品中莱克多巴胺的量。

2.根据权利要求1所述的畜产品中莱克多巴胺的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）中含有生物素标记的RAC核酸适配体的序列如SEQ ID No.1所示，其5’端连接有生物素；探针的序列如SEQ ID No.2所示；探针储液的浓度为10μM。

3.根据权利要求2所述的畜产品中莱克多巴胺的检测方法，其特征在于：所述退火的条件为95℃ 5min，0℃ 10min；Tris-HCl缓冲液pH为7，经修饰的磁珠溶液的浓度为3mg/mL。

4.根据权利要求1所述的畜产品中莱克多巴胺的检测方法，其特征在于，所述步骤（2）中AuNPs溶液的制备方法为：向100℃的100mL 1mM氯金酸溶液中迅速加入10mL 39mM的柠檬酸三钠，继续沸腾15min，之后搅拌冷却至室温。

5.根据权利要求4所述的畜产品中莱克多巴胺的检测方法，其特征在于：所述Hp探针的序列如SEQ ID No.3所示，其5’端设有巯基，Sp探针的序列如SEQ ID No.4所示，其5’端设有生物素。

6.根据权利要求5所述的畜产品中莱克多巴胺的检测方法，其特征在于：所述Hp探针溶液和Sp探针溶液的浓度为10μM， PBS缓冲液为pH7.0的含有0.3M NaCl的10mM PBS溶液，AuNPs溶液、Hp探针溶液和Sp探针溶液的体积比为5:2:2；混合液的总体积为500μL。

7.根据权利要求1所述的畜产品中莱克多巴胺的检测方法，其特征在于：所述步骤（3）中待测样品溶液为畜产品经粉碎后过100目筛所得的溶液；磁珠溶液、待测样品溶液和修饰有Hp-Sp探针的AuNPs溶液的体积比为4:4:12.5，用PBS缓冲液重悬采用的PBS缓冲液的体积为100μL、pH7.0。

8.根据权利要求1所述的畜产品中莱克多巴胺的检测方法，其特征在于：所述步骤（4）中

链亲霉素-辣根过氧化物酶浓度为0.01mg/mL，醋酸盐缓冲溶液为含有2mM ABTS、2.5mMH₂O₂的浓度为0.1M、pH4.2的醋酸盐缓冲液，叠氮钠溶液的浓度为10mM；样品检测液、链亲霉素-辣根过氧化物酶、含有ABTS和H₂O₂的醋酸盐缓冲溶液和叠氮钠溶液的体积比为100:0.5:200:2。

9.根据权利要求8所述的畜产品中莱克多巴胺的检测方法，其特征在于：所述吸光度与莱克多巴胺浓度的线性方程为y = 0.002x + 0.337，R²= 0.964。

10.权利要求1-9任一项所述的检测方法在检测猪肉、羊肉、牛肉、鸡肉中的应用。