[发明专利]一种利用表面增强拉曼光谱对肺癌肿瘤标志物进行检测的方法

权利要求书

1.一种利用表面增强拉曼光谱对肺癌肿瘤标志物进行检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：将Au NRs与Au@4MBN@Ag NPs进行DNA探针功能化修饰后与肺癌肿瘤标志物miRNA-21共同孵育后，进行拉曼检测。

2.根据权利要求1所述一种利用表面增强拉曼光谱对肺癌肿瘤标志物进行检测的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)制备Au NRs-DNA1溶液；

(2)制备Au@4MBN@Ag NPs-DNA2；

(3)37℃下在超纯水或血清(标准溶液溶剂为超纯水，实际样品检测及可行性分析时溶剂为血清)中将10μL miRNA-21与1mL Au NRs-DNA1和1mL Au@4MBN@Ag NPs-DNA2共同孵育，随后离心去除多余的miRNA-21，得到以Au NRs-DNA1为中心，Au@4MBN@Ag NPs-DNA2在周围自组装的核-卫星等离子体纳米结构溶液，将其沉积在铝片进行拉曼检测。

3.根据权利要求2所述一种利用表面增强拉曼光谱对肺癌肿瘤标志物进行检测的方法，其特征在于，步骤(1)的具体步骤为：将硫醇修饰的DNA1加入到Au NRs溶液中剧烈搅拌10min，-20℃低温振荡20min后逐渐升温到30℃，离心重分散；得到Au NRs-DNA1溶液。

4.根据权利要求2或3所述一种利用表面增强拉曼光谱对肺癌肿瘤标志物进行检测的方法，其特征在于，步骤(2)的具体步骤为：将硫醇修饰的DNA2加入到Au@4MBN@Ag NPs溶液中剧烈搅拌10min，-20℃低温振荡20min后升温到30℃，离心重分散；得到Au@4MBN@Ag NPs-DNA2溶液。

5.根据权利要求4所述一种利用表面增强拉曼光谱对肺癌肿瘤标志物进行检测的方法，其特征在于，所述Au NRs合成步骤如下：

A1、制备种子溶液：将氯金酸溶液与CTAB溶液混合，加入硼氢酸钠溶液加热搅拌以制备种子溶液；

A2、制备生长液：在30℃时将硝酸银溶液加入到CTAB和油酸钠的混合溶液中，静置10min，随后加入HAuCl₄连续搅拌90min得到生长液；

A3、将种子溶液和抗坏血酸加入到生长液中，合成Au NRs。

6.根据权利要求5所述一种利用表面增强拉曼光谱对肺癌肿瘤标志物进行检测的方法，其特征在于：所述Au@4MBN@Ag NPs的合成方法为将柠檬酸钠加入沸腾的HAuCl₄中剧烈搅拌15min生成金核；随后加入4-腈基硫酚形成Au-S共价键，磁力搅拌30min，第一次离心后重分散，随后逐滴加入AgNO₃溶液和抗坏血酸，搅拌60min，第二次离心后得Au@4MBN@AgNPs。

7.根据权利要求6所述一种利用表面增强拉曼光谱对肺癌肿瘤标志物进行检测的方法，其特征在于：步骤A3所述种子溶液与抗坏血酸体积比分别为为1：0.5-2.5。

8.根据权利要求7所述一种利用表面增强拉曼光谱对肺癌肿瘤标志物进行检测的方法，其特征在于：所述第一次离心速度为9500rpm，时间为12min；第二次离心速度为8600rpm，时间为10min。

9.根据权利要求8所述一种利用表面增强拉曼光谱对肺癌肿瘤标志物进行检测的方法，其特征在于：所述DNA1的序列为(SH-TTT TTT TTT TTC AAC ATC AGT，5′→3′)；DNA2的序列为(CTG ATA AGC TAT TTT TTT TTT-SH，5′→3′)。

10.根据权利要求9所述一种利用表面增强拉曼光谱对肺癌肿瘤标志物进行检测的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，所述孵育温度为37℃，时间为12h，离心速度为4000rpm，时间为5min。