[发明专利]一种母菊中新型α-甜没药醇合成酶(MrBAS)启动子的特性及功能分析的方法有效
| 申请号： | 202210974067.X | 申请日： | 2022-08-15 |
| 公开（公告）号： | CN115287287B | 公开（公告）日： | 2023-10-24 |
| 发明（设计）人： | 许锋;叶家保;郑嘉瑞;张威威;廖咏玲;王莉娜;王启剑;陈强文 | 申请（专利权）人： | 长江大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/84;C12N15/56;A01H5/02;A01H5/12;A01H6/20;A01H6/82 |
| 代理公司： | 杭州研基专利代理事务所(普通合伙) 33389 | 代理人： | 肖竹芸 |
| 地址： | 434023*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 母菊中 新型 没药 合成 mrbas 启动子 特性 功能分析 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种母菊中新型α-甜没药醇合成酶(MrBAS)启动子的特性及功能分析的方法，其特征在于，所述方法包括：
步骤1：通过TAIL-PCR染色体步移技术从母菊中克隆α-甜没药醇合成酶基因的启动子序列；
步骤2：将步骤1中克隆到的启动子序列进行一代测序获得启动子序列，进行后续启动子分析和不同片段启动子克隆引物设计；
步骤3：通过Gataway的方法将克隆得到的MrBAS启动子全长及5个不同片段构建到表达载体pKGWFS7上与GUS形成融合表达载体pKGWFS7-BAS，同时以pKGWFS7作为负对照，以pKGWFS7-35S作为正对照；
步骤4：将步骤3构建的表达载体pKGWFS7-BAS、pKGWFS7和pKGWFS7-35S转入农杆菌LBA4404；
步骤5：对步骤4中含有不同MrBAS启动子片段的农杆菌通过注射烟草叶片来验证不同长度启动子的活性；对步骤4中含有MrBAS全长启动子的农杆菌通过花絮侵染法获得转基因拟南芥；
步骤6：对步骤5注射的烟草进行GUS活性检测分析不同片段启动子的活性；对转基因拟南芥进行GUS染色和活性分析。
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