[发明专利]一种落羽杉胚性愈伤组织的超低温冷冻保存方法有效
| 申请号： | 202210971775.8 | 申请日： | 2022-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN115176708B | 公开（公告）日： | 2023-07-04 |
| 发明（设计）人： | 陈婷婷;华建峰;於朝广;殷云龙;贾晓瑜 | 申请（专利权）人： | 江苏省中国科学院植物研究所 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04;A01H4/00 |
| 代理公司： | 南京智转慧移知识产权代理有限公司 32649 | 代理人： | 金伟 |
| 地址： | 210014 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 落羽杉 胚性愈伤 组织 超低温 冷冻 保存 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种落羽杉胚性愈伤组织的超低温冷冻保存方法，其特征在于，包括：
1)挑取并轻轻按压落羽杉胚性愈伤组织，加入液体培养基，制备为胚性愈伤组织细胞悬浮液；
所述液体培养基的配方为DCR+2,4-D1～2mg/L+6-BA0.2～0.5mg/L+VC10mg/L+谷氨酰胺0.4～0.6g/L+水解酪蛋白0.5～1.0g/L+活性炭2.0～2.5g/L+麦芽糖20～25g/L；
所述胚性愈伤组织细胞悬浮液的细胞密度为0.4g/mL～0.6g/mL；
2)向胚性愈伤组织细胞悬浮液中加入甘露醇进行高渗脱水处理；所述胚性愈伤组织细胞悬浮液中甘露醇的终浓度为0.6M；所述高渗脱水处理时间为12h；
3)脱水处理完成后，向胚性愈伤组织细胞悬浮液中加入冷冻保护剂终浓度为10％的DMSO，再将其分装到冻存管中，置于冰上静置，冰上静置时间为60min；静置结束后冻存管在降温仪中以1℃/min的速度降温进行程序降温冷冻；
4)将冻存管保存至液氮环境中。
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