[发明专利]一种检测和筛选细胞壁靶向抗生素的全细胞微生物传感器

权利要求书

1.一种报告质粒，其特征在于：所述报告质粒是将报告基因和位于所述报告基因上游的P_blaA启动子构建到载体质粒上得到的。

2.如权利要求1所述的报告质粒，其特征在于：所述报告基因为荧光素酶基因luxCDABE、荧光蛋白基因或β-半乳糖苷酶基因。

3.如权利要求1所述的报告质粒，其特征在于：所述P_blaA启动子的核苷酸序列如SEQ IDNo:1所示。

4.如权利要求1所述的报告质粒，其特征在于：所述报告质粒是将P_blaA启动子构建于含荧光素酶基因luxCDABE的质粒上获得。

5.如权利要求1所述的报告质粒，其特征在于：所述含荧光素酶基因luxCDABE的质粒的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示。

6.如权利要求1所述的报告质粒，其特征在于：所述报告质粒的核苷酸序列如SEQ IDNo:3所示。

7.包含如权利要求1所述的报告质粒的全细胞微生物传感器，其特征在于：所述全细胞微生物传感器是将上述报告质粒转入blaA基因缺陷的S.oneidensis MR-1菌株获得的。

8.如权利要求7所述的全细胞微生物传感器，其特征在于：所述报告质粒以接合的方式转入blaA基因缺陷的Shewanella oneidensis MR-1菌株。

9.如权利要求8所述的全细胞微生物传感器，其特征在于：所述的接合以含有所述报告质粒的Escherichia coli WM3064菌株为供体菌。

10.如权利要求9所述的全细胞微生物传感器，其特征在于：所述报告质粒按如下步骤转入blaA基因缺陷的S.oneidensis MR-1菌株：

(1)将含有所述报告质粒的E.coli WM3064菌株接种至新鲜的含300μM2,6-二氨基庚二酸的LB液体培养基中，37℃、200rpm培养12h，得到种子液A；所述种子液A以1％的体积接种量接种至新鲜LB液体培养基中37℃、200rpm培养至OD₆₀₀＝0.4，得到菌液A；

(2)将blaA基因缺陷的S.oneidensis MR-1菌株接种至3mL新鲜LB液体培养基中30℃、200rpm培养12h，得到种子液B；所述种子液B以1％的体积接种量接种至新鲜LB液体培养基中37℃、200rpm培养至OD₆₀₀＝0.4，得到菌液B；

(3)以体积比为2：1混合所述菌液A和所述菌液B，离心，弃上清，底部菌体再两次用新鲜LB液体培养基重悬并离心后，所得沉淀加入新鲜LB液体培养基再次重悬，所得混合菌液滴加到含300μM 2,6-二氨基庚二酸的LB平板表面，30℃下接合16h后，用新鲜LB液体培养基冲洗平板，所得冲洗液离心，所得沉淀重悬于新鲜LB液体培养基中并涂布于含有25μg/mL氯霉素的LB平板上，30℃培养16h，挑取单菌落进行PCR验证，得到所述全细胞微生物传感器。