[发明专利]一种海洋贻贝消化腺组织病理损伤的定量方法

说明书

本发明公开了一种海洋贻贝消化腺组织病理损伤的定量方法，首先将贻贝消化腺组织解剖，并制成HE染色组织切片，通过显微观察将其转化为数字图像，对贻贝消化腺消化管壁进行测量并进行定量指标统计。本发明能够定量描述贻贝消化腺组织所受病理损伤，得到具体的、可信度高的、受主观经验干扰少的量化数据。本发明为贻贝消化腺组织损伤研究提供有力工具，为污染物导致的生物组织水平响应研究提供了检测手段。

技术领域

本发明涉及生态毒理学技术领域，特别涉及一种海洋贻贝消化腺组织病理损伤的定量方法。

背景技术

贻贝广泛分布在从淡水到海洋，从浅海到深海的各种生境。贻贝进行滤食活动，代谢率低，对污染物具有很强的富集能力，可以较好的反映水体的污染情况，因此被认为是海洋中理想的环境检测生物之一，其组织病理变化也可以指示生物损害与海洋环境健康状况。

贻贝组织病理指标是一类对外源胁迫敏感和可靠的生物标志。目前，贻贝组织病理指标应用较多的为组织定性和半定量指标，它们虽能显示生物组织的结构变化，但是由于是对病理图像的主观评价，容易产生误差，可信度不高。组织病理的定量指标能够给出具体的量化数据，受主观经验干扰少，是对病理图像的客观评价。

但目前关于贻贝的定量指标的研究少且不全面，其中已报道的相关研究中存在以下不足：利用消化腺管腔面积、周长等定量指标对贻贝进行健康评估，其在定量过程中需要临摹消化管，而在实际工作中，每个生物样本需要统计上百个消化管，工作量巨大、耗时长、不便于推广。

发明内容

本发明的目的在于提供一种海洋贻贝消化腺组织病理损伤的定量方法，避免人为操作造成的结构损伤并且可以得出具体的、受主观经验干扰少得量化数据，对贻贝组织病理图像客观评价，可信度高，较好反映贻贝消化腺的损伤程度，进而评估贻贝的健康状态，暗示周围环境对于贻贝带来影响；此外该方法与贻贝组织健康状态直接相关，并容易测量，便于推广，客观评价病理图像，应用价值高。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种海洋贻贝消化腺组织病理损伤的定量方法，包括以下步骤：

（1）组织切片：

按照标准贻贝组织生理切片操作进行，包括：贻贝的培养，贻贝组织解剖与固定，组织脱水与透明化，组织包埋与透明化，切片、摊片与烤片，HE染色与封片，最终获得切片；

（2）显微观察：

用光学显微镜使用100×和400×两个不同倍数观察每张切片，检查合格后，对每张切片随机拍照获取至少100个消化腺细胞照片，获得消化腺数字图像，用于后续组织病理学分析；检查合格即检查在切片过程中没有出现明显气泡、折叠及其他问题

（3）定量指标：以海洋贻贝消化腺管腔壁厚度作为海洋贻贝消化腺组织病理损伤定量检测指标，以正常海洋贻贝消化腺数字图像作为对照组进行定量测定，定量测定的方法为：将消化腺数字图像导入到图像软件处理，在图像软件中测量消化管壁厚，获得每张切片的测量值，对测得的原始数据进行统计分析，经统计分析获得的平均值作为定量指标，将测试组与对照组的定量指标进行比对，即可对海洋贻贝消化腺组织病理损伤进行定量分析。

作为优选，步骤（1）中，HE染色与封片的具体步骤包括：脱蜡，至水，苏木精染色，分化反蓝，伊红染色，脱水及透明化。

作为优选，步骤（1）中，对于每个处理组设置3个生物重复，对于每一个生物重复获得3张切片。

作为优选，步骤（2）中，对每张切片随机拍照获取至少100个消化腺细胞照片是在400×放大倍数下进行的。