[发明专利]一种粘多糖贮积症生物标记物及应用

权利要求书

1.一种生物标志物在制备粘多糖贮积症的筛查、不同亚型诊断或风险评估的产品中的应用，其特征在于，所述生物标志物为软骨素ABC酶和肝素裂解酶裂解的二糖单元；其中，所述肝素裂解酶包括肝素裂解酶I、肝素裂解酶II和肝素裂解酶III；

所述生物标志物包括艾杜糖酸-(1-O-4)-N-磺基胺基葡萄糖苷、艾杜糖酸-(1-O-4)-N,6-二磺基胺基葡萄糖苷、4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-3)-6-磺基-N-乙酰胺基半乳糖苷、4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-4)-N-乙酰胺基葡萄糖苷、4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-3)-N-磺基胺基葡萄糖苷；

用于区分MPS I型的生物标志物为4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-4)-N-乙酰胺基葡萄糖苷、4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-3)-N-磺基胺基葡萄糖苷、4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-3)-6-磺基-N-乙酰胺基半乳糖苷和艾杜糖酸-(1-O-4)-N-磺基胺基葡萄糖苷；当标志物4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-4)-N-乙酰胺基葡萄糖苷、4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-3)-N-磺基胺基葡萄糖苷、4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-3)-6-磺基-N-乙酰胺基半乳糖苷含量相对于正常人群升高，且能够检测到艾杜糖酸-(1-O-4)-N-磺基胺基葡萄糖苷时，即判定为MPS I型；

用于区分MPS II型的生物标志物为4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-4)-N-乙酰胺基葡萄糖苷、4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-3)-N-磺基胺基葡萄糖苷、4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-3)-6-磺基-N-乙酰胺基半乳糖苷和艾杜糖酸-(1-O-4)-N,6-二磺基胺基葡萄糖苷；当标志物4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-4)-N-乙酰胺基葡萄糖苷、4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-3)-N-磺基胺基葡萄糖苷、4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-3)-6-磺基-N-乙酰胺基半乳糖苷含量相对于正常人群升高，且能够检测到艾杜糖酸-(1-O-4)-N,6-二磺基胺基葡萄糖苷时，即判定为MPSII型；

用于区分MPS IVA型的生物标志物为4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-4)-N-乙酰胺基葡萄糖苷、4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-3)-N-磺基胺基葡萄糖苷、4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-3)-6-磺基-N-乙酰胺基半乳糖苷含量、艾杜糖酸-(1-O-4)-N-磺基胺基葡萄糖苷和艾杜糖酸-(1-O-4)-N,6-二磺基胺基葡萄糖苷；当标志物4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-4)-N-乙酰胺基葡萄糖苷、4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-3)-N-磺基胺基葡萄糖苷含量相对于正常人群未见变化，同时，标志物4,5-不饱和葡萄糖酸-(1-O-3)-6-磺基-N-乙酰胺基半乳糖苷含量相对于正常人群升高，且未检出艾杜糖酸-(1-O-4)-N-磺基胺基葡萄糖苷和艾杜糖酸-(1-O-4)-N,6-二磺基胺基葡萄糖苷时，即判定为MPS IVA型。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生物标志物的样本来自尿液、血清、血浆、全血、干血斑中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生物标志物的检测方法包括如下步骤：

1）待测样品准备，所述待测样品为尿液样本；

2）样本酶解和蛋白沉淀：在待测的尿液样本中加入酶溶液和孵育缓冲液进行孵育，孵育后蛋白沉淀，离心取上清液；

3）上机检测：采用液相色谱串联质谱法对步骤2）得到的上清液进行检测，针对性检测二糖单元；

其中，步骤2）中，所述酶溶液包括软骨素裂解酶ABC溶液和肝素裂解酶溶液；其中，所述肝素裂解酶溶液包括肝素裂解酶I溶液、肝素裂解酶II溶液和肝素裂解酶III溶液。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤2）中，孵育温度为37±1℃，孵育时间为10~18 h；所述孵育缓冲液含Tris40-60mM，乙酸钠50-60 mM，pH为7.0-7.5。