[发明专利]靶向膜联蛋白A1的纳米抗体及其制备方法与应用在审
| 申请号： | 202210946415.2 | 申请日： | 2022-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN116217719A | 公开（公告）日： | 2023-06-06 |
| 发明（设计）人： | 李金声;丁有斌;徐小龙;龙颖;贾琳;李茁;李志杰;王继刚 | 申请（专利权）人： | 深圳市人民医院 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C07K16/00;C12N15/70;C12N15/13;G01N33/574;A61K47/68 |
| 代理公司： | 深圳壹舟知识产权代理事务所(普通合伙) 44331 | 代理人： | 孔祥丹 |
| 地址： | 518000 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 靶向 蛋白 a1 纳米 抗体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种靶向膜联蛋白A1的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括纳米抗体Nb4，其中，所述纳米抗体Nb4的氨基酸序列如Seq.ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的靶向膜联蛋白A1的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括4个框架区FR1、FR2、FR3、FR4和3个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3；
所述纳米抗体Nb4中，FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，FR2的氨基酸序列如SEQID NO.3所示，FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
3.根据权利要求1所述的靶向膜联蛋白A1的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体Nb4的碱基序列如Seq.ID NO.9所示。
4.一种权利要求1～3任一所述的靶向膜联蛋白A1的纳米抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将膜联蛋白A1进行表达纯化，得到膜联蛋白A1目的蛋白；
将所述膜联蛋白A1目的蛋白包被在免疫管上进行富集筛选，得到噬菌体文库；
将所述噬菌体文库的洗脱液进行PCR扩增并进行ELISA验证，再进行二代测序，并根据测序结果合成纳米抗体的基因序列；
将所述纳米抗体的基因序列克隆至表达载体中得到重组质粒，将所述重组质粒转入宿主细胞中诱导表达并进行纯化，得到靶向膜联蛋白A1的纳米抗体。
5.根据权利要求4所述的靶向膜联蛋白A1的纳米抗体的制备方法，其特征在于，所述目的蛋白的浓度为25～27μg/mL。
6.根据权利要求4所述的靶向膜联蛋白A1的纳米抗体的制备方法，其特征在于，所述富集筛选的步骤中，进行2～3轮富集筛选。
7.根据权利要求4所述的靶向膜联蛋白A1的纳米抗体的制备方法，其特征在于，所述表达载体选自PET-14B载体。
8.权利要求1～3任一所述的靶向膜联蛋白A1的纳米抗体在制备靶向膜联蛋白A1的分子探针中的应用。
9.权利要求1～3任一所述的靶向膜联蛋白A1的纳米抗体在制备用于肿瘤靶向治疗的药物中的应用。
10.权利要求1～3任一所述的靶向膜联蛋白A1的纳米抗体在免疫治疗以及纳米材料修饰的药物递送中的应用。
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