[发明专利]凝血酶-抗凝血酶复合体的测定试剂及测定方法

说明书

一种凝血酶‑抗凝血酶复合体(TAT)测定试剂，其特征在于，其包含结合在胶乳粒子上的与抗凝血酶侧结合的抗体和结合在胶乳粒子上的与凝血酶(T)侧结合的抗体，所述与抗凝血酶侧结合的抗体对TAT的反应性为对游离抗凝血酶的反应性的100倍以上，并且优选以使测定时的pH达到5.8～6.6的方式构成。

本申请是申请日为2016年03月29日、发明名称为“凝血酶-抗凝血酶复合体的测定试剂及测定方法”的申请号为201680017680.5的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及对活体试样中的凝血酶(T)-抗凝血酶(AT)复合体(TAT)进行测定的试剂及方法。

背景技术

凝血酶-抗凝血酶复合体(TAT)是在血液凝固时产生在血液中的蛋白复合体，血液中的TAT的定量对于弥漫性血管内凝血(DIC)等血栓形成的诊断有用。然而，TAT的存在量是游离抗凝血酶的存在量的约十万分之一，因此不容易测定。

现在主流的TAT定量法包括西门子公司的Enzygnost(注册商标)TAT micro等使用酶免疫测定法(ELISA)的试剂盒及LSI MEDIENCE公司的STACIA(注册商标)CLEIA TAT等使用化学发光酶免疫测定法(CLEIA)的试剂盒，但均是需要固相-液相分离(B/F分离)的测定法，需要烦杂的清洗作业，需要手动作业或专用设备。

专利文献1～3及5中报道了在使用胶乳凝聚法的TAT测定中所用的试剂体系，但均是通过将体外合成的TAT用缓冲液进行稀释而制作的样品的测定，并未报道出能够使用胶乳凝聚法对人检体中的TAT准确地进行浓度测定的试剂。另外，这些文献记载的方法均是依存于抗体的特异性来构建TAT测定试剂或利用添加剂来避免由该交叉反应性带来的影响。专利文献4公开了通过使用不具有交叉反应性的抗体的夹心(sandwich)法进行的TAT测定，但是并不具有对于在临床上利用而言充分的灵敏度。另外，在任一文献中均未就定量实际检体中的TAT时对测定反应时的pH的测定结果的影响进行研究，迄今为止并没有在利用胶乳免疫凝聚法测定TAT时以酸性侧的pH进行反应的实例。

基于以上情况，在测定简便的胶乳凝聚法中需要高灵敏度、高精度地测定活体试样中的TAT的试剂及方法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2001－289850号公报

专利文献2：日本特开平7－238099号公报

专利文献3：日本特开2002－316999号公报

专利文献4：日本特开平3－48158号公报

专利文献5：日本特开2001－228153号公报

发明内容

发明要解决的课题

本发明的课题在于提供使用不必须进行B/F分离或清洗作业的胶乳凝聚法的活体试样中的TAT的测定试剂及测定方法、以及提供高效选择其所使用的抗体的方法。

关于TAT的测定，从提高DIC诊断基准的灵敏度、特异度的观点出发，并且从用于在TAT测定值为正常时DIC为否定的排除诊断的使用可能性的观点出发，确认了其临床上的有用性。但是，现在需要烦杂手艺的ELISA法和需要专用设备的CLEIA法成为主流，这也是测定普及慢的原因。

因此，在测定简便的胶乳凝聚法中需要高灵敏度、高精度地测定活体试样中的TAT的试剂及方法。

另外，在考虑其临床意义的情况下，需要与CLEIA法同等的能够以数纳克单位进行测定的检测灵敏度，但从所使用的粒子的特性等其测定原理考虑，利用胶乳凝聚法达成与CLEIA法同等的灵敏度是非常困难的课题。