[发明专利]一种获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法

说明书

本发明提供了一种获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法，包括以下步骤：(1)去除哺乳动物卵裂期胚胎的透明带，并分离获得至少一个无透明带保护的单个卵裂细胞；(2)向培养皿中加入透明质酸钠双相凝胶，然后加入培养液；所述透明质酸钠双相凝胶由交联透明质酸钠和游离透明质酸钠组成；(3)将所述单个卵裂细胞分别嵌入透明质酸钠双向凝胶中，放入细胞培养箱中培养，获得至少一个相同遗传背景的胚胎。本发明方法不会对单个卵裂细胞造成损伤，可保留单个卵裂细胞的正常发育潜能，从而简单、高效地获得至少一个具有相同遗传背景的胚胎，在胚胎移植和哺乳动物育种方面具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于胚胎培养技术领域，具体涉及一种获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法。

背景技术

受精卵形成后需要经过不断的卵裂最终形成由多细胞组成的胚胎。在卵裂的早期阶段，特别是2细胞、4细胞阶段，各个卵裂球的发育全能性基本上是相同的，均具有发育成完整子代的能力。

胚胎移植是一种应用于哺乳动物的繁殖新技术，是胚胎工程的重要组成部分。如果能获得多个同一来源的胚胎，不仅可使胚胎移植所用胚胎数目成倍增加，而且可以产生遗传性能相同的后代，缩短育种间隔，加快遗传育种进程；而且获得多个相同遗传背景的哺乳动物胚胎也可以在动物胚胎干细胞实验中发挥较大的作用，在生产克隆动物、生产转基因动物、促进组织工程发展、用于细胞治疗、研究胚胎发育的基因调控等层面的应用进行研究，大幅提升动物胚胎干细胞在畜牧业、医疗行业的应用效果，为社会发展创造更大财富。

目前常用的胚胎切割术尚存在较明显弊端，在对于早期胚胎的切割分离操作中，需要去除透明带，并回装多个透明带，透明带的数目及来源本身不太容易提供；在桑葚期和囊胚期，切割分离操作需要用分割针或分割刀对等切开，还要注意内细胞团的均等分割。现有技术在实施过程中，存在着操作步骤繁琐、对操作人员技术水平要求高、还会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育等弊端。

因此，急需一种简单、高效的获得多个相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法，能简单、有效、便利地提供同一遗传背景的胚胎。

具体技术方案如下。

一种获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法，包括以下步骤：(1)去除哺乳动物卵裂期胚胎的透明带，并分离获得至少一个无透明带保护的单个卵裂细胞；(2)向培养皿中加入透明质酸钠双相凝胶，然后在所述透明质酸钠双相凝胶上方加入培养液；所述透明质酸钠双相凝胶由交联透明质酸钠和游离透明质酸钠组成；(3)将所述单个卵裂细胞分别嵌入透明质酸钠双向凝胶中，放入细胞培养箱中培养，获得至少一个相同遗传背景的胚胎。

在一些实施例中，所述透明质酸钠双相凝胶中交联透明质酸钠和游离透明质酸钠的重量比为1：(1.2～6)。

在一些优选的实施例中，所述透明质酸钠双相凝胶中交联透明质酸钠和游离透明质酸钠的重量比为1：(1.2～4)，更优选为1：(1.5～3.5)。

在一些实施例中，所述交联透明质酸钠由选自丁二醇缩水甘油醚、二乙烯基砜、双磺基琥珀酰亚胺辛二酸酯、3,3′-二硫双磺基琥珀酰亚胺丙酸酯、4,4′二硫双磺基琥珀酰亚胺丁酸酯中的至少一种的交联剂制备而成。

在一些优选的实施例中，所述交联剂选自丁二醇缩水甘油醚。

在一些实施例中，所述步骤(2)还包括将所述培养皿置于培养箱中，使所述透明质酸钠双相凝胶的pH值与所述培养液的pH值相同。

在一些实施例中，所述卵裂期胚胎为2细胞、4细胞或8细胞胚胎。

在一些实施例中，使用显微切割针去除卵裂期胚胎的透明带。

在一些实施例中，所述胚胎来源于小鼠、大鼠、兔、猪、猴、牛、羊、狗或马。