[发明专利]一种获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法在审
申请号: | 202210933008.8 | 申请日: | 2022-08-04 |
公开(公告)号: | CN115161265A | 公开(公告)日: | 2022-10-11 |
发明(设计)人: | 吴克良;陈子江 | 申请(专利权)人: | 山东大学 |
主分类号: | C12N5/073 | 分类号: | C12N5/073 |
代理公司: | 广州广典知识产权代理事务所(普通合伙) 44365 | 代理人: | 万志香 |
地址: | 250100 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 获得 相同 遗传 背景 哺乳动物 胚胎 方法 | ||
1.一种获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)去除哺乳动物卵裂期胚胎的透明带,并分离获得至少一个无透明带保护的单个卵裂细胞;(2)向培养皿中加入透明质酸钠双相凝胶,然后在所述透明质酸钠双相凝胶上方加入培养液;所述透明质酸钠双相凝胶由交联透明质酸钠和游离透明质酸钠组成;(3)将所述单个卵裂细胞分别嵌入透明质酸钠双向凝胶中,放入细胞培养箱中培养,获得至少一个相同遗传背景的胚胎。
2.如权利要求1所述的获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法,其特征在于,所述透明质酸钠双相凝胶中交联透明质酸钠和游离透明质酸钠的重量比为1:(1.2~6)。
3.如权利要求1所述的获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法,其特征在于,所述透明质酸钠双相凝胶中交联透明质酸钠和游离透明质酸钠的重量比为1:(1.2~4)。
4.如权利要求1~3任一项所述的获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法,其特征在于,所述交联透明质酸钠由选自丁二醇缩水甘油醚、二乙烯基砜、双磺基琥珀酰亚胺辛二酸酯、3,3′-二硫双磺基琥珀酰亚胺丙酸酯、4,4′二硫双磺基琥珀酰亚胺丁酸酯中的至少一种的交联剂制备而成。
5.如权利要求1~4任一项所述的获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法,其特征在于,所述步骤(2)还包括将所述培养皿置于培养箱中,使所述透明质酸钠双相凝胶的pH值与所述培养液的pH值相同。
6.如权利要求1~4任一项所述的获得多个相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法,其特征在于,所述卵裂期胚胎为2细胞、4细胞或8细胞胚胎。
7.如权利要求1~4任一项所述的获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法,其特征在于,使用显微切割针去除卵裂期胚胎的透明带。
8.如权利要求1~4任一项所述的获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法,其特征在于,所述胚胎来源于小鼠、大鼠、兔、猪、猴、牛、羊、狗或马。
9.如权利要求1~4任一项所述的获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法,其特征在于,所述培养皿选自细胞培养皿、96孔板、48孔板、24孔板、12孔板、4孔皿。
10.如权利要求1~4任一项所述的获得相同遗传背景的哺乳动物胚胎的方法,其特征在于,所述培养液选自胚胎培养液、受精液培养液、卵裂胚培养液、囊胚培养液、体外操作培养液中的至少一种。
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