[发明专利]一种产生犬冠状病毒的单克隆抗体的杂交瘤细胞株及单克隆抗体及应用

说明书

本发明提供一种产生犬冠状病毒的单克隆抗体的杂交瘤细胞株及单克隆抗体及应用，属于生物检测技术领域。为了提供一种灵敏度高、特异性强的检测犬冠状病毒的方法。本发明提供一种产生犬冠状病毒的单克隆抗体的一对杂交瘤细胞株，所述一对杂交瘤细胞株是杂交瘤细胞株1B2和3C2，所述杂交瘤细胞株1B2的保藏号为CGMCC No.45200，所述杂交瘤细胞株3C2的保藏号为CGMCC No.45199。本发明通过单克隆抗体技术针对CCV病毒制备了单克隆抗体用杂交瘤细胞系1B2和3C2，单克隆抗体针对不同CCV病毒毒株具有较高特异性，制备的胶体金检测试纸条灵敏度高，特异性好，从而更准确快速地检测犬冠状病毒。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种产生犬冠状病毒的单克隆抗体的杂交瘤细 胞株及单克隆抗体及应用。

背景技术

犬冠状病毒(CCV)属冠状病毒科冠状病毒属，为单股正链RNA病毒该病毒形态特征， 具有类似冠状的纤突，有囊膜，呈圆形或椭圆形，大小80-120nm。犬冠状病毒主要有4种结构蛋白分别为纤突蛋白(S，Spike Protein，180-220kD)是受体结合位点；小包膜糖蛋白(E， Envelope Protein，9–12kD)，此蛋白较小与包膜结合；跨膜蛋白M蛋白(M，Transmembrane Protein，29-32kD)负责营养物质的跨膜运输和新生病毒出芽释放与病毒外包膜的形成；核蛋 白N蛋白(N，Nucleocapsid Protein，50–60kD)与病毒的RNA紧密结合成病毒的核心壳。

犬冠状病毒(canine coronavirus，CCV)是1种严重危害养犬业、经济动物养殖业和野生 动物保护的病毒性传染病病源。犬冠状病毒可以引起犬类呕吐、腹泻、脱水及易复发为特性 的高度接触性传染病，一年四季均可发生。该病对幼犬危害尤其严重，病死率较高。病犬和 带毒犬是主要传染源，病毒通过直接接触和间接接触，经呼吸道和消化道传染给健康犬及其 他易感动物。感染犬可通过粪便排毒2周或更长时间，传染性粪便污染的环境是传染的主要 原因。

目前CCV无有效疫苗用于预防，也无特效疗法，因此早期诊断非常重要。CCV的常见临床症状，不易于与其他的肠道病原，如CPV-2，犬轮状病毒和犬腺病毒区分。因此CCV 的诊断需要实验室确诊。用于粪便样品中CCV的检测的诊断技术包括电镜(EM)，细胞培养 分离病毒(VI)，病毒基因检测(RT-PCR)和胶体金检测试纸条等。

在电镜(EM)，细胞培养分离病毒(VI)，病毒基因检测(RT-PCR)检测方法中，其需要特殊 的设备与专业技术人员，检测时间长，成本较高。而胶体金检测方法具有操作简单，检测灵 敏，能稳定保存，不需要特殊设备和熟练的专业技术人员，便于兽医人员在临床或田间使用， 成本较低等优点。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种灵敏度高、特异性强的检测犬冠状病毒的方法。

本发明提供一种产生犬冠状病毒的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述一种杂交瘤细胞株 是杂交瘤细胞株1B2所述杂交瘤细胞株1B2的保藏号为CGMCC No.45200，保藏地址为中 国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2022年7月1日或所述一种杂 交瘤细胞株是杂交瘤细胞株3C2所述杂交瘤细胞株3C2的保藏号为CGMCC No.45199，保 藏地址为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2022年7月1日。

本发明提供一种犬冠状病毒的单克隆抗体，所述单克隆抗体为抗体1B2，所述抗体1B2 为杂交瘤细胞株1B2产生的抗体或所述单克隆抗体为抗体3C2，所述抗体3C2为杂交瘤细胞 株3C2产生的抗体。