[发明专利]治疗性多价HPV mRNA疫苗及其制备方法

权利要求书

1.mRNA分子，其特征在于，所述mRNA分子包括核糖体跳跃元件连接的至少两个编码片段，所述编码片段编码的多肽具有HPV病毒肽表位免疫原性；

所述HPV病毒肽表位包括蛋白E1、E2、E4、E5、E6、E7、L1或L2；

所述核糖体跳跃元件选自P2A、F2A、T2A、E2A或F2A30；

所述核糖体跳跃元件的5′端通过连接序列连有弗林蛋白酶样序列，所述弗林蛋白酶样序列编码的短肽中碱性氨基酸所占比例为50％～100％；

所述连接序列编码的短肽为(GSG)_nAP，所述n为1～4。

2.根据权利要求1所述的mRNA分子，其特征在于，所述mRNA分子的核苷酸序列由5′端至3′端包括依次连接的第一编码片段、弗林蛋白酶样序列、连接序列、核糖体跳跃元件和第二编码片段；

所述第一编码片段和第二编码片段均独立地编码具有E6或E7免疫原性的多肽，且不相同；

所述弗林蛋白酶样序列编码的短肽优选为R_mX_nR_o，所述m为1～2；X为Q、F或H；n为0～2；o为1～2；

所述核糖体跳跃元件优选为F2A。

3.根据权利要求2所述的mRNA分子，其特征在于，编码具有E6免疫原性多肽的核苷酸序列如Seq_1(优化后的HPV16 E6)所示；

编码具有E7免疫原性多肽的核苷酸序列如Seq_2(优化后的HPV16E7)所示；或者，

编码具有E6免疫原性多肽的核苷酸序列如Seq_3(优化后的HPV18E6)所示；

编码具有E7免疫原性多肽的核苷酸序列如Seq_4(优化后的HPV18E7)所示。

4.权利要求1～3任一项所述mRNA分子在制备治疗性mRNA疫苗中的应用。

5.治疗性mRNA分子，其特征在于，所述治疗性mRNA分子包括依次连接的5′UTR元件、信号肽元件、权利要求1～3任一项所述的mRNA分子和3′UTR元件。

6.根据权利要求5所述的治疗性mRNA分子，其特征在于，所述5′UTR元件的核苷酸序列如Seq_5～8任一项所示；

所述信号肽元件的核苷酸序列如Seq_9所示；

所述弗林蛋白酶样序列的氨基酸序列如Seq_10～14任一项所示；

所述连接序列的氨基酸序列如Seq_15～18任一项所示；

所述3′UTR元件的核苷酸序列如Seq_19～22任一项所示。

7.根据权利要求5或6所述的治疗性mRNA分子，其特征在于，所述治疗性mRNA分子的尿嘧啶，胞嘧啶或腺嘌呤核苷酸含有修饰基团，所述修饰基团包括假尿苷、N1-甲基假尿苷、N1-乙基假尿苷、5-甲基胞嘧啶、2-硫尿苷、5-甲氧基尿苷或N1-甲基腺苷中至少一种。

8.治疗性mRNA疫苗的制备方法，其特征在于，选择原始质粒构建表达权利要求5或6所述治疗性mRNA分子的重组质粒，体外转录得到的mRNA加Cap帽和poly(A)尾后，经脂质纳米颗粒包封得到mRNA疫苗；

优选地，所述原始质粒选自pVAX1、pTNT、pCR2.1-TOPO或pGEM-T；

优选地，所述体外转录的反应体系中使用假尿苷三磷酸替换UTP；

优选地，所述脂质纳米颗粒的制备方法包括，D-Lin-MC3-DMA、DSPC、Cholesterol和DMG-PEG 2000的无水乙醇溶液混合后，加入到柠檬酸盐缓冲液，经脂质体挤出器挤出后得到脂质体纳米颗粒。

9.权利要求8所述制备方法得到的重组质粒。

10.权利要求8所述制备方法得到的治疗性mRNA疫苗。