[发明专利]一株猕猴桃内生拮抗细菌贝莱斯芽孢杆菌及其应用

说明书

本发明提供一株猕猴桃内生拮抗细菌贝莱斯芽孢杆菌及其应用，所述菌株WL‑23为贝莱斯芽孢杆菌，该菌株已于2022年6月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2022978。从猕猴桃叶片上分离出来的对猕猴桃多种病原真菌和病原细菌具有较强抑制活性的内生细菌WL‑23，经形态学和分子生物学鉴定该菌株为贝莱斯芽孢杆菌，该菌株的无菌发酵液对Psa同样具有较好的抑制活性，并能诱导猕猴桃产生抗性，实验表明WL‑23的无菌发酵液可以破坏Psa的细胞膜完整性和其细胞结构，从而抑制Psa的正常生长，使得其对溃疡病的发生具有良好的防效。因此具有潜在的商业开发和应用价值，在猕猴桃溃疡病生物防治中具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于植物病害生物防治技术领域，更具体地说，特别涉及一株猕猴桃内生拮抗细菌贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)及其应用。

背景技术

猕猴桃(Actinidia spp.)又名中华猕猴桃(Actinidia chinensis Planch.)，因为其富含维生素C、钾、钙、以及胡萝卜素等，被人们称为“水果之王”。中国是种植猕猴桃面积最大的国家，占到了全球猕猴桃种植面积的72％，但是随着种植面积的增加，猕猴桃在生产过程中遭到了各种病原菌的迫害，这影响了猕猴桃的生长发育，其中对猕猴桃产业发展影响最为严重是由丁香假单胞猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringaepv.Actinidiae,Psa)引起的猕猴桃溃疡病，在被 Psa侵染后，猕猴桃树体会流出白色细菌性菌浓，会导致猕猴桃花朵不能正常绽放，影响授粉，严重时会导致整个果园树体大面积死亡。

因为Psa具有传播速度快、侵染能力强、难以防治等特点。目前，防治猕猴桃溃疡病发生的方法主要是通过喷施铜制剂和抗生素类药物，但长期不规范的使用，极易对猕猴桃树体造成毒害、加速Psa抗药性的产生、造成农药残留超标。随着人们生活质量的提高，对食品的安全性也越来越重视，因此环境友好型，安全无害的防治方法逐渐受到人们的关注。

生物防治方法中的微生物农药，因为其无公害、无污染、无残留、防治成本低，不易产生抗药性等特点，成为当前病害防治研究的热点。研究主要涉及的生防微生物包括链霉菌、假单胞杆菌、木霉菌、芽孢杆菌等。其中芽孢杆菌具有分布广泛、种类繁多、抗逆性好等特性，使得它更有利于开发成具有较高潜力生物防治剂。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一株猕猴桃内生拮抗细菌贝莱斯芽孢杆菌及其应用，本发明从健康的猕猴桃叶面筛选出一株对猕猴桃溃疡病致病菌等多种病原菌具有较强拮抗作用，根据形态学特征和分子生物学方法将其鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)，通过试验测定了活菌及其无菌发酵液的抑菌性，可用于猕猴桃溃疡病等多种病害的防治。

本发明一株猕猴桃内生拮抗细菌贝莱斯芽孢杆菌及其应用的目的与功效，由以下具体技术手段所达成：

一株猕猴桃内生拮抗细菌贝莱斯芽孢杆菌，所述菌株分类命名为贝莱斯芽孢杆菌WL-23(Bacillus velezensis WL-23)，其保藏编号为：CCTCC NO:M2022978，保藏日期为：2022年 6月27日。

所述菌株从猕猴桃叶片上分离获得。

所述菌株对猕猴桃果实腐烂病致病菌有拮抗作用。

所述方法为：将菌株WL-23的发酵液喷施于猕猴桃叶面或灌根。

所述方法为：制备WL-23菌悬液或无菌发酵液喷施叶面或灌溉根部。

所述方法为：制备菌株WL-23无菌发酵滤液，将滤液喷施于猕猴桃树体上。

所述发酵液的制备方法为：将贝莱斯芽孢杆菌WL-23在营养琼脂培养基(NA)中画线活化，在35℃培养48h后，挑取单菌落接种于营养肉汤(NB)液体培养基中，在35℃、180rmp培养96h-120h，即可获得所属菌株的发酵液。