[发明专利]一种黄花草木樨中香豆素的提取方法及其应用

说明书

本发明涉及一种黄花草木樨中香豆素的提取方法及其应用，黄花草木樨中香豆素的提取方法，包括以下步骤：(1)用乙醇提取黄花草木樨粉末，过滤，减压浓缩，得粗提物1；(2)加蒸馏水分散粗提物1，先后用石油醚、乙酸乙酯萃取，合并萃取液，浓缩干燥得粗提物2；(3)对粗提物2进行硅胶柱层析；经薄层色谱分离，得三种浓缩固体；(4)用无水乙醇分别溶解三种浓缩固体，回流，冷却析晶，得香豆素、东莨菪内酯、滨蒿内酯。本发明提取的香豆素组分抗菌活性高，实验表明，香豆素浓度为1.0mg/mL的抑菌率为96.03％，可以较好地抑制菜豆壳球孢，说明香豆素可用于菜豆壳球孢引起病害的防治，拓宽了草木樨资源的开发利用途径。

技术领域

本发明涉及一种黄花草木樨中香豆素的提取方法及其应用，属于植物源农药领域。

背景技术

芝麻病害是影响芝麻生产的主要因素之一，每年造成的减产损失达到总产量的15％～20％，这其中70％以上是由病原真菌引起的。长期以来，化学农药是防治真菌病害的主要途径。化学农药的长期施用对人类健康和生态环境造成严重的风险。寻找安全、高效的真菌病害防治方法是当前农业生产中迫在眉睫的问题。植物源农药是来源于大自然的天然农药，不会造成农药残留、对人畜安全，是代替化学农药的首选生物农药之一。目前，植物源农药已成为全球农药研发的新趋势。

草木樨[Melilotusofficinalis]为豆科草木樨属，草木樨中含有众多成分，如黄酮、香豆素、酚酸、皂苷、萜类等，具有清热、解毒、消炎、抗凝血、抑菌等作用。目前黄花草木樨应用到农业抑菌方面研究的还未见报道，主要集中在黄花草木樨对疾病的治疗中，如将黄花草木樨提取物进行了药效学研究，发现其具有显著的消肿和抗炎活性；以黄花草木樨为原料制成口服试剂，用于治疗水肿等。

草木樨的传统溶剂提取法主要有煎煮法、浸渍法、回流法、连续回流法、渗漉法等。由于天然产物结构和性质较为复杂，上述方法普遍存在提取率低、周期长、花费成本高、操作复杂等问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种黄花草木樨中香豆素的提取方法及其应用。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种黄花草木樨中香豆素的提取方法，包括以下步骤：

(1)向黄花草木樨粉末中加入乙醇溶液，在超声辅助的条件下进行提取，过滤、合并提取液，于40～55℃条件下，减压浓缩成浸膏状，即得粗提物1；

(2)加蒸馏水分散粗提物1，用石油醚、乙酸乙酯依次萃取，各萃取2～3次，合并乙酸乙酯萃取液，浓缩干燥得粗提物2；

(3)将粗提物2吸附在硅胶粉上制样，然后干法上样，进行硅胶柱层析；以石油醚和乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，收集各洗脱液，经薄层色谱分离，合并相同的组分，浓缩干燥至固体，得到浓缩固体1、浓缩固体2、浓缩固体3，4℃保存，备用；

(4)用无水乙醇分别溶解所述浓缩固体1、浓缩固体2和浓缩固体3，于78℃条件下回流30min，随后冷却至室温，待晶体析出，过滤，用冰乙醇冲洗，三种浓缩固体的操作方法相同，得到三种晶体析出物，分别为香豆素、东莨菪内酯、滨蒿内酯。

步骤(1)黄花草木樨粉末的粒径为60～80目；乙醇溶液的体积分数为50％～90％；草木樨与乙醇提取液的料液比为1kg：15～20L。

步骤(1)超声提取时的超声时间为50～60min，超声功率为200～400W，提取温度为50～60℃，提取次数为2～3次。

步骤(2)萃取时，石油醚与粗提物1水溶液的体积比为2～3：1；乙酸乙酯与粗提物1水溶液的体积比为2～3：1。