[发明专利]一种检测黄曲霉毒素B1的纳米抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种检测黄曲霉毒素B1的纳米抗体及其应用，属于食品检测领域。所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明通过构建双峰驼免疫抗体文库，用噬菌体展示技术，将检测抗原固相包被于酶标板上，投入双峰驼免疫抗体文库进行亲和淘筛，获得一种抗黄曲霉毒素B1特异性结合的纳米抗体。并将该纳米抗体应用于黄曲霉毒素B1的免疫学检测分析，通过此免疫检验分析建立了一种快速、灵敏并且稳定的黄曲霉毒素B1的检测方法。本发明为食品领域黄曲霉毒素B1的特异性快速检测提供了新的方法。

技术领域

本发明涉及食品检测领域，特别是涉及一种检测黄曲霉毒素B1的纳米抗体及其应用。

背景技术

黄曲霉毒素是一种剧毒的致肝癌物质，其中黄曲霉毒素B1可引起细胞错误地修复DNA，导致严重的DNA诱变，还可抑制DNA和RNA的合成，从而抑制蛋白质的合成。从我国肝癌流行病学调查研究中发现，某些地区人群膳食中黄曲霉毒素的污染水平与原发性肝癌的发生率呈正相关。在我国谷物及其制品中黄曲霉毒素B1最高限量为20μg/kg。

通过采用高效液相色谱法、色谱法和质谱法对AFB1进行检测，已经做了大量的工作并取得了一定的成绩。然而，上述方法、耗时的预处理步骤和专业操作人员使AFB1的检测具有挑战性。利用抗体和抗原特异性结合的免疫测定法由于其普遍适用性、高灵敏度、简单和低成本的优势而被广泛认可和使用。抗体是分子识别和检测的核心，在最广泛使用的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb)中，需要克服一些关键的缺点，包括分子量大、制备过程昂贵、可重复性差和容易失活。重链抗体(VHH，也叫Nanobody)的可变结构域，是最小的抗体(只有15kDa)，是来自骆驼的抗体的一个片段，这种新型抗体具有低免疫原性、高稳定性、高亲和力、高特异性等特点。Nanobody(Nb)既具有单克隆抗体的优点，同时拥有优越的稳定性和易表达性。由于其易于遗传操作和在原核系统中可溶性表达的优越性，不同的双功能Nbs已被探索用于食品环境分析和人类健康诊断，但是由于特异性、灵敏度和稳定性差的问题限制了其应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测黄曲霉毒素B1的纳米抗体及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，利用该纳米抗体可以特异性结合黄曲霉毒素B1，为快速、灵敏、特异性的检测黄曲霉毒素B1提供了新的免疫学检测方法。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种检测黄曲霉毒素B1的纳米抗体，所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示：

VLAALLQGVQAQVQLVDSGGGSVQAGGSLRLSCVASGYTLSNYCMGWFRQVSGKEREGVAGIWTGGGSIWYADSVKGRFTISQDKDKKTLYLQMNSLKPEDTAVYYCAARWSGSWSGCSGRDYNYWGQGTQVTVSS。

更优选的是，如图7所示，所述纳米抗体的框架区FR1的氨基酸为：VLAALLQGVQAQVQLVDSGGGSVQAGGSLRLS；所述纳米抗体的框架区FR2的氨基酸为：WFRQVSGKEREGVAG；所述纳米抗体的框架区FR3的氨基酸为：IWYADSVKGRFTISQDKDKKTLYLQMNSLKPEDTAVYY；所述纳米抗体的框架区FR4的氨基酸为：QGTQVTVSS；所述纳米抗体的互补决定区CDR1的氨基酸为：CVASGYTLSNYCMG；所述纳米抗体的互补决定区CDR2的氨基酸为：IWTGGGS；所述纳米抗体的互补决定区CDR3的氨基酸为：CAARWSGSWSGCSGRDYNYWG。

本发明还提供编码所述的纳米抗体的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示：