[发明专利]抗血栓、促组织再生的三层仿生人工血管及其制备方法

权利要求书

1.一种抗血栓、促组织再生的三层仿生人工血管，其特征在于，由内至外依次包括：

管状内层，其由高分子材料、天然血管内膜脱细胞基质和抗血栓剂通过静电纺丝制得；构成所述管状内层的纤维呈轴向分布；

管状中层，其由高分子材料和天然血管中膜脱细胞基质通过静电纺丝制得；

构成所述管状中层的纤维呈圆周取向；

管状外层，其由高分子材料通过静电纺丝制得；

构成所述管状外层的纤维取向随机分布。

2.根据权利要求1所述的抗血栓、促组织再生的三层仿生人工血管，其特征在于，所述高分子材料为聚己内酯、聚氨基甲酸酯、聚乙醇酸、聚L-丙交酯-co-ε-己内酯中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的抗血栓、促组织再生的三层仿生人工血管，其特征在于，所述抗血栓剂为红景天苷。

4.根据权利要求1所述的抗血栓、促组织再生的三层仿生人工血管，其特征在于，天然血管内膜脱细胞基质和天然血管中膜脱细胞基质具体通过以下方法制备：

(1)天然血管脱细胞

第一步：5mM EDTA+4％NaCl 50mM Tris-HCL溶液处理；超纯水清洗；

第二步：5mM EDTA+10mM Tris-HCL(pH 7.4)溶液处理；超纯水清洗；

第三步：0.25％胰蛋白酶+0.02％EDTA溶液，摇床震荡处理，灭菌超纯水清洗；

第四步：在1％Triton X-100(pH7.4)+5mM Tris-HCl溶液中处理，1％双抗；灭菌超纯水清洗；

第五步：在脱氧核糖核酸酶150ug/ml DNAase和15ug/ml RNAase(sigma)混合溶液中消化，灭菌超纯水清洗；

(2)脱细胞基质粉末的制备

首先，将步骤(1)中脱细胞血管进行内膜、中膜的分离，具体操作：在超净工作台中，用手术镊将血管竖立起来，可以看到明显的血管壁上内中膜的分层情况，按照分层的纹路进行剥离，分别得到内膜、中膜；

其次，对剥离分好的内、中膜再次生理盐水清洗，置于冷冻干燥机中分别冷冻干燥；

最后，干燥的血管脱细胞基质在冷冻研磨仪中研磨成粉末，收集细胞外基质粉末并将其保存在-20℃中，备用。

5.根据权利要求1-4任一项所述的抗血栓、促组织再生的三层仿生人工血管的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、溶液配制

将高分子材料溶于有机溶剂中，制备溶液一；

将抗血栓剂加入溶液一中，制备溶液二；

将天然血管内膜脱细胞基质加入溶液二中，制备溶液三；

将天然血管中膜脱细胞基质加入溶液一中，制备溶液四；

S2、静电纺丝制备人工血管

先将溶液三采用静电纺丝纺成管状内层，内层制备过程中在接收器中加入磁场引导纤维呈轴向分布；

在所述管状内层外，将溶液四采用湿法纺丝沿圆周方向纺成管状中层；

在所述管状中层外，将溶液一采用静电纺丝纺成管状外层。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：

溶液一中，高分子材料和有机溶剂的用量比为0.8-1g∶10mL；

溶液二中，抗血栓剂和溶液一的用量比为200-300μg∶1mL；

溶液三中，天然血管内膜脱细胞基质和溶液二的用量比为0.005-0.01g∶1mL；

溶液四中，天然血管中膜脱细胞基质和溶液一的用量比为0.005-0.01g∶1mL。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：

管状内层纺丝条件：电压为8-12kV，流速为1-8mL/h，接收速度2000-3000rpm，接收时长5-15min；

管状中层纺丝条件：电压为8-12kV，流速为2-8mL/h，接收速度2000-3000rpm，接收时长5-15min；

管状外层纺丝条件：电压为8-12kV，流速为2-8mL/h，接收速度2000-3000rpm，接收时长3-8min。