[发明专利]一种碱性磷酸酶的检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及医学检测技术领域，尤其涉及一种碱性磷酸酶的检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括缓冲液、醋酸镁、硫酸锌、HEDTA和唾液酸苷酶；所述R2试剂包括缓冲液、胰肽酶和硝基苯酚磷酸酯。实验表明，本发明在R1试剂中添加一定量的唾液酸苷酶，在R2中添加一定量的胰肽酶，显著提高了试剂的反应度。

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，尤其涉及一种碱性磷酸酶的检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

碱性磷酸酶(ALP或AKP)是一种磷酸单酯酶，主要以游离形式存在，极少量与脂蛋白和免疫球蛋白结合。血清中的ALP来源于不同的组织(肝、骨、肾、小肠、胎盘等)，主要来自肝脏和骨骼。主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。患这些疾病时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。在机体中的主要生理功能是在成骨过程中水解磷酸酯，为羟基磷灰石的沉积提供必要的磷酸，同时水解焦磷酸盐，解除其对骨盐形成的抑制作用，有利于成骨作用。因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症、佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时，血清碱性磷酸酶亦可升高，应加以鉴别。

在基础研究领域，常用的测定ALP活性的方法有荧光测定法、化学(生物)发光分析法、电化学分析法及表面增强共振拉曼散射法等。然而，这些方法由于检测过程繁琐以及需要复杂昂贵的科学仪器和专业的操作人员，所以限制了它们的进一步应用(碱性磷酸酶活性荧光检测方法的研究进展_赵丹)。在临床检测中，碱性磷酸酶的测定方法主要有以下几种：β-甘油磷酸钠法、磷酸苯二钠比色法以及磷酸对硝基酚连续监测法。磷酸苯二钠比色法与更早的β-甘油磷酸钠法相比具有较大的进步。磷酸苯二钠比色法水解速度快，故保温时间较短，且该法灵敏度较高，显色稳定，不需去蛋白，操作简单、快速。但与磷酸对硝基酚连续监测法相比，准确度、精密度较低，操作比较繁琐，灵敏度低。

现有技术：血清中ALP在碱性条件下转移对硝基苯酚磷酸酯(NPP)的磷酰基至水和2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)分子，生成对酰基苯酚。在碱性条件下，对硝基苯酚以对硝基苯氧离子形式存在，成黄色，在405nm波长处有较强吸收，而对硝基苯酚磷酸酯无色。在底物过剩条件下，对硝基苯氧离子的生成速率与血清ALP浓度成正比，因而可以通过对硝基苯氧离子升高测定血清ALP活性浓度。

普遍的ALP试剂盒的R1和R2组成成分为：R1试剂：AMP缓冲液(PH 10.5)0.1-1.0mol/L、醋酸镁1-5mmol/L、硫酸锌1-5mmol/L、HEDTA 1-5mmol/L；R2试剂：对硝基苯酚磷酸酯20-100mmol/L。

采用上述试剂盒对磷酸对硝基酚进行连续监测时，如果要提高反应度，需要提高底物浓度。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种碱性磷酸酶的检测试剂盒及其制备方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

血清中ALP在碱性条件下转移对硝基苯酚磷酸酯(NPP)的磷酰基至水和2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)分子，生成对酰基苯酚。在碱性条件下，对硝基苯酚以对硝基苯氧离子形式存在，成黄色，在405nm波长处有较强吸收，而对硝基苯酚磷酸酯无色。在底物过剩条件下，对硝基苯氧离子的生成速率与血清ALP浓度成正比，因而可以通过对硝基苯氧离子升高测定血清ALP活性浓度。

一种碱性磷酸酶的检测试剂盒，由R1试剂和R2试剂组成；

所述R1试剂包括缓冲液、醋酸镁、硫酸锌、HEDTA和唾液酸苷酶；

所述R2试剂包括缓冲液、胰肽酶和硝基苯酚磷酸酯。