[发明专利]一种香蕉胚性愈伤组织的诱导方法及其培养基

说明书

本发明提供了一种香蕉胚性愈伤组织的诱导方法及其培养基，属于植物组织培养技术领域。本发明通过外植体的选择、特定的两步诱导处理，结合设计的诱导培养基配方等，建立了高效稳定的胚性愈伤组织诱导体系，克服了现有技术中香蕉胚性愈伤组织的诱导方法诱导率低、诱导时间长、具有品种基因型局限性等问题。本发明能够显著降低诱导培养过程中的褐化问题、提高了胚性愈伤组织诱导率、缩短了诱导时间，且适合多种不同基因型香蕉品种，可为香蕉的体胚发生体系的建立奠定基础，也为香蕉的生物技术育种提供一种有力的技术保障。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种香蕉胚性愈伤组织的诱导方法及其培养基。

背景技术

香蕉是世界重要的水果兼粮食作物，也是全球鲜果消费量和贸易额最大的水果。但主栽香蕉品种单一、优良品种匮乏及多种环境胁迫严重威胁着香蕉产业的健康发展。培育高产、高抗病、抗逆香蕉新品种是目前世界香蕉产业迫切解决的问题，而传统杂交育种因绝大多数香蕉品种高度不育而使得传统杂交育种极为困难，一般的诱变育种又具有盲目性大、诱变效率极低且嵌合体比例高，很难诱变出新的优良性状，而基因工程育种是解决香蕉育种难题的一个有力的新途径。

目前香蕉转基因育种进展缓慢，最关键的问题是没有建立一套高效、稳定的体胚发生体系。体细胞胚胎发生体系具有遗传稳定性强、再生率高、不受自然条件限制等优点。体胚发生过程通常包括胚性愈伤组织诱导、胚性愈伤组织增殖、体细胞胚的分化成熟和体胚萌发及植株再生等几个阶段。而胚性愈伤组织诱导作为体胚发生的第一步在香蕉体胚发生体系中具有重要地位。

有关香蕉胚性愈伤组织的诱导方法、继代增殖、体胚再生和遗传转化等相关文章虽然也有不少报道，但是都或多或少存在一些缺陷，如胚性愈伤组织诱导率低、诱导时间长、具有品种基因型局限性等问题。而导致前期研究中胚性愈伤组织诱导率低的主要原因是培养过程中容易褐化、以及诱导出的胚性愈伤比例极低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种香蕉胚性愈伤组织的诱导方法及其培养基，以解决现有技术中香蕉胚性愈伤组织诱导效果较差的问题。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种香蕉胚性愈伤组织前体的诱导培养基，以水为溶剂，包含如下浓度的组分：

KNO₃2800～2850mg/L、(NH₄)₂SO₄400～500mg/L、KH₂PO₄300～500mg/L、MgSO₄·7H₂O150～200mg/L、CaCl₂·2H₂O 100～200mg/L、Na₂EDTA 35～40mg/L、FeSO₄·7H₂O 25～30mg/L、肌醇80～120mg/L、盐酸硫胺素5～15mg/L、盐酸吡哆素0.5～1.5mg/L、烟酸0.5～1.5mg/L、MnSO₄·4H₂O 5～15mg/L、ZnSO₄·7H₂O 1.5～2.5mg/L、H₃BO₃2.5～3.5mg/L、KI 0.5～1.0mg/L、Na₂MoO₄·2H₂O 0.1～0.5mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.01～0.05mg/L、CoCl₂·6H₂O 0.01～0.05mg/L、2,4-D 2～6mg/L、生物素0.5～1.5mg/L、NAA 0.5～1.5mg/L、IAA0.5～1.5mg/L、谷氨酰胺80～120mg/L、麦芽提取物50～150mg/L、活性炭0.3～0.8g/L、蔗糖20～50g/L、卡拉胶5～10g/L。