[发明专利]一种PCV2 ORF3特异性多肽及应用

说明书

本发明公开了一种PCV2ORF3特异性多肽及应用，涉及生物技术领域。本发明公开了一种PCV2ORF3特异性多肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还公开了该特异性多肽在制备检测PCV2抗体的ELISA试剂盒中的应用。本发明选择ORF3蛋白作为目标抗原，通过分子生物学的方法预测分析其抗原表位，利用其特异性多肽作为包被抗原建立了一种检测PCV2抗体的ELISA方法，该方法具有良好的重复性、敏感性和特异性，可以从PCV2亚单位疫苗免疫猪群中鉴别出PCV2野毒感染猪，为猪场的PCV2净化提供了有力的技术支撑。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种PCV2 ORF3特异性多肽及应用。

背景技术

猪圆环病毒2型(PCV2)与猪的许多疾病综合征有关，其中最常见的是断奶后多系统衰竭综合征，这些疾病被统一称为猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)，对养猪业危害巨大(Jeong，et al.，2018)。PCV2既可水平传播，也可垂直传播(Dvorak，et al.，2013；Eddicks，et al.，2019)，因此传播迅速。自1998年发现以来，已经成为养猪业中最重要的病毒病之一(Zhai，et al.，2014)。据调查，在疫区猪场，血清学检测阳性率20-80％，发病率高达60％，伴随3-10％的致死率(Afolabi，et al.，2017)。

PCV2感染猪体后，主要在猪体淋巴组织和其它部位的滤泡性树状细胞、组织细胞和巨噬细胞内出现病毒的进行性积累，导致淋巴细胞显著凋亡、缺损，巨噬细胞和多核巨细胞胞浆中分布大量典型的病毒包涵体，严重破坏猪的免疫系统，造成免疫功能低下，机体抵抗力弱，容易诱发其他疾病(Richmond，et al.，2015；Du Q，et al.，2018)。现已发现其是蓝耳病毒、细小病毒、伪狂犬病毒、附红细胞体等疾病的重要诱因(Fan，et al.，2013；Du Q，etal.，2018)。因此，控制圆环病毒2型的感染至关重要。

除了采取综合防治措施外，疫苗免疫接种已经成为病毒污染严重猪场防控猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV-2)感染的主要措施。目前常用的PCV2疫苗有亚单位疫苗和全病毒灭活疫苗。因全病毒灭活疫苗生产成本高，基于ORF2编码的Cap蛋白的基因工程疫苗(Blanchard，et al.，2003)成为当前应用最广泛的疫苗。然而，近期的研究发现，疫苗接种可能影响在畜群中循环的PCV2基因型，2010年后PCV2d经常在接种的畜群中发现(Hennig-Pauka，2019)。现在PCV2d已经成为最优势的流行毒株，即使在接种过疫苗的猪群中，也不能排除这种基因型能够在接种过疫苗的猪中复制的进化优势(Xiao，et al.，2016)。因此，在免疫猪场，PCV2感染的评价和检测对于该病的预防及控制就显得尤为重要。尽管可以采用PCR的方法进行检测(Lyoo，et al.，2008)，但其操作复杂，难以批量进行，实际生产中还需要一种在免疫猪群中批量检测野毒感染猪的方法，ELISA方法就非常适合这种检测。

PCV2属于圆环病毒科圆环病毒属，为单股环状DNA病毒(Ren，et al.，2016)。PCV2基因组有3个主要的开放性阅读框(ORFs)：ORF1、ORF2和ORF3。ORF1编码Rep蛋白，是病毒DNA复制必不可少的(Cheung，2004)，其和PCV1具有较高的同源性；ORF2编码结构衣壳蛋白(Cap蛋白)，是引起宿主免疫应答的主要抗原物质，同时对病毒复制也很重要(Lv，et al.，2014)；ORF3编码的蛋白现称为ORF3蛋白，通过诱导宿主细胞凋亡参与PCV2致病过程(Liu，et al.，2006，2007)，是主要的致病蛋白。

发明内容

本发明的目的是提供一种PCV2 ORF3特异性多肽及应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明选择ORF3蛋白作为目标抗原，通过分子生物学的方法预测分析其抗原表位，利用其特异性多肽作为包被抗原建立了一种检测PCV2抗体的ELISA检测方法，可以从PCV2亚单位疫苗免疫猪群中鉴别出PCV2野毒感染猪，为猪场的PCV2净化提供了有力的技术支撑。