[发明专利]干细胞细胞因子的制备方法及其抗体联用的制药用途

说明书

本发明涉及干细胞细胞因子的制备方法及其抗体联用的制药用途。本发明开发了一种特异性针对人BRD4蛋白的单克隆抗体，该抗体能够抑制癌细胞克隆形成以及影响细胞活力，通过与干细胞细胞因子联用后能够达到抑制癌细胞肿瘤生长的效果，具有较好的应用前景。

技术领域

本申请涉及生物领域，还涉及干细胞细胞因子的制备方法及其抗体联用的制药用途。

背景技术

恶性黑色素瘤(malignant melanoma)是起源于胚胎期神经嵴的恶性肿瘤，其恶性度极高，预后较差。可发生于皮肤、眼球、消化道、生殖系统等部位，但其中以皮肤恶性黑色素瘤最常见。由于恶性黑色素瘤恶性度高，易于早期转移，即使早期进行根治手术，患者5年生存率也低于70％。免疫靶向治疗与传统化学疗法相比优势明显，因而日益成为治疗恶性肿瘤的新方向。

嵌合抗原受体(chimericantigenreceptors，CAR)是-种重组抗原受体，具有结合抗原并激活T细胞的功能。利用HERV-K的肿瘤特异性，于T细胞表面设计相关CAR，发现CAR-T可特异性识别HERV-K并与其结合，发挥抗肿瘤作用。恶性黑色素瘤早期即可通过血液转移，传统的手术切除、化学疗法、放射疗法的效果不佳，预临床试验数据显示，嵌合HERV-K受体的T细胞(CAR-T)可准确作用于表达HERV-K的肿瘤细胞表面，并杀伤肿瘤细胞。由于HERV-K在正常细胞表面无表达，其特异性表达于HIV、白血病及多种肿瘤细胞表面，因此，嵌合HERV-K受体的T细胞可用于多种肿瘤的治疗。

外泌体作为-种可以包裹药物的载体以及治疗药物，近年来也被用于肿瘤的靶向治疗以及单独治疗使用。外泌体是经细胞分泌产生的-种自然产物，它具有低免疫原性、无毒副作用；且来源广，具有磷脂双分子层结构，易于与靶细胞的细胞膜融合；分子结构小，分子量为纳米级(10-100nm)，可避免单核细胞的吐噬作用，且易于穿透肿瘤组织毛细血管向深层组织浸润。现有试验发现，由内皮细胞及干细胞分泌的外泌体作为抗肿瘤药物的载体，其优势明显、不良反应小。经未成熟树突状细胞(imDCs)分泌的外泌体因缺乏CD40、CD86、MHC-I、MHC-II等表面标志物，免疫原性低，且imDCs-外泌体表面表达糖蛋白(Lamp2b)，这种表面蛋白融合了iRGD靶向蛋白，可特异性识别肿瘤细胞表面的V整合素。目前，临床上许多抗肿瘤药物因剂量依赖性而应用受限，如阿霉素对多种肿瘤均有抑制作用，但因其对心血管具有剂量依赖性而限制其应用[271。剂量依赖性产生的原因主要是药物缺乏特异性作用于肿瘤细胞的载体，而广泛作用于正常细胞引起。利用外泌体的靶向结合作用，可以将阿霉素等药物直接作用于肿瘤细胞，从而减少对正常细胞造成的损伤。通过基因转染技术过表达iRGD就可以得到大量携带iRGD的外泌体。基于这-原理，将阿霉素整合到imDCs-外泌体中，发现融合iRGD靶向蛋白的外泌体能特异性作用于表达V整合素的乳腺肿瘤细胞，使外泌体通过胞吐释放阿霉素，在体内充分发挥抗肿瘤作用。而且单独使用外泌体来治疗癌症也是目前研究的重要方向。