[发明专利]一种改进的引导编辑系统及其应用

权利要求书

1.一种改进的引导编辑系统，其特征在于，包括pegRNA和融合蛋白，所述融合蛋白为由nCas9(H840A)和M-MLV组成的融合蛋白，其中，nCas9(H840A)的N端连接有T5核酸外切酶或Pol-N核酸外切酶；

所述pegRNA依次由sgRNA和PBR+RT序列组成；

所述nCas9(H840A)的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述M-MLV的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述T5核酸外切酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述Pol-N核酸外切酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的引导编辑系统，其特征在于，所述nCas9(H840A)的编码基因具有SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列，或为SEQ ID NO.5互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.1的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的引导编辑系统，其特征在于，所述M-MLV的编码基因具有SEQID NO.6所示的核苷酸序列，或为SEQ ID NO.6互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2的核苷酸序列。

4.根据权利要求1所述的引导编辑系统，其特征在于，所述T5核酸外切酶的编码基因具有SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列，或为SEQ ID NO.7互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.3的核苷酸序列。

5.根据权利要求1所述的引导编辑系统，其特征在于，所述Pol-N核酸外切酶的编码基因具有SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列，或为SEQ ID NO.8互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.4的核苷酸序列。

6.权利要求1所述的引导编辑系统在1)-4)任一种中的应用：

1)生物体或生物细胞基因组序列的编辑；

2)制备生物体或生物细胞基因组序列的编辑的产品；

3)提高生物体或生物细胞基因组序列的编辑效率；

4)制备提高生物体或生物细胞基因组序列的编辑效率的产品。

所述生物体为植物或动物。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述编辑为碱基替换、碱基插入和碱基删除。

8.一种基因组序列的编辑方法，其特征在于，包括如下步骤：

使生物体或生物细胞表达权利要求1所述的引导编辑系统；

所述生物体为植物或动物。

9.一种生物突变体的制备方法，其特征在于，利用权利要求1所述的引导编辑系统对生物体的基因组进行编辑，获得生物突变体；

所述生物体为植物或动物。