[发明专利]一种检测乳腺癌组织粒淋比的免疫双标试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及免疫组织化学技术领域，公开了一种检测乳腺癌组织粒淋比的免疫双标试剂盒及其应用，试剂盒包括混合一抗、混合二抗和显色底物，混合一抗包括来自不同种属动物的CD66b抗体和CD8抗体，CD66b抗体和CD8抗体可在同一乳腺癌组织切片上同时反应；混合二抗包括用于标记混合一抗的辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)；显色底物使混合二抗显色。本发明的有益效果在于：通过一次免疫组化染色流程在一张切片上完成两种分子靶标的同步检测，得出乳腺癌肿瘤组织浸润中性粒细胞与淋巴细胞比值(iNLR)，进而评估乳腺癌患者的预后情况，染色过程简便快捷，且染色稳定、色彩分明，临床预后的判断准确度高。

技术领域

本发明涉及免疫组织化学技术领域，尤其涉及一种检测乳腺癌组织粒淋比的免疫双标试剂盒及其应用。

背景技术

中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)目前被认为是包括癌症在内的多种疾病条件下出现全身炎症的标志，目前，临床上多使用外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值(pNLR)来预测恶性肿瘤患者的预后和治疗反应。然而，外周血免疫细胞容易受到其他因素的影响，如肥胖、炎症等，其严重干扰对肿瘤患者预后和治疗反应的预测。

如已有多篇文献报道pNLR与肿瘤预后相关性存在矛盾，Suppan等(Neutrophil/Lymphocyte ratio has no predictive or prognostic value in breast cancerpatients undergoing preoperative systemic therapy[J].BMC Cancer,2015,15:1027.)进行回顾性研究分析，结果未能显示pNLR对接受术前全身治疗的乳腺癌患者的无病生存率或治疗反应的影响。Ivars等(Neutrophil-lymphocyte ratio in metastaticbreast cancer is not an independent predictor of survival,but depends onother variables[J].Sci Rep,2019,9(1):16979.)分析发现pNLR与转移性乳腺癌患者的预后情况相关，COX单因素分析显示pNLR与乳腺癌患者总生存期显着相关；但当其他临床协变量被纳入多因素分析时，pNLR与总生存期相关性不显著，说明虽然pNLR较高的转移性乳腺癌患者的总生存期较差，但pNLR的预后影响可能其与其他相关临床预后因素的存在不同程度的相关性。因此，寻找更准确的预测方法迫在眉睫。

我们知道，免疫细胞在身体各个部位分布广泛，由于肿瘤细胞的特殊性，免疫细胞经常被重编程，进而影响肿瘤的发生发展进程。尤其是其中的中性粒细胞和淋巴细胞表面有很多粘附蛋白，粘附蛋白可作为标志物进行检测，本申请拟通过观察肿瘤细胞巢内浸润的中性粒细胞和淋巴细胞的浸润密度，计算其肿瘤浸润中性粒细胞与淋巴细胞比值(iNLR)，预测恶性肿瘤患者的预后。但中性粒细胞从未成熟到成熟过程中，其表面标记物有很大的变化，未成熟的分化中性粒细胞可表达CD15、CD11b、CD16和CD10；成熟的循环中性粒细胞，已有报道表达CD16hi、CXCR2hi、CXCR4 low和CD62Lhi的表型；激活的中性粒细胞，通常表达CD11b、CD18和CD66b。淋巴细胞又可分为T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤(NK)细胞，其中T淋巴细胞主要参与体内的细胞免疫，主要分为CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞。在肿瘤预后的相关性研究中，免疫细胞能否被准确的检测，也是决定肿瘤预后结果的重要因素。

目前，免疫组织化学染色(immunohistochemistry，IHC)是病理学诊断、鉴别诊断、肿瘤特异性分子靶标筛选、鉴定的最重要平台性技术。近年来，在肿瘤个体化治疗前的特异性分子靶标检测中发挥重要作用。IHC技术已发展成为一种原位检测分子靶标的不可替代的基础性平台技术，由于传统IHC采在一张组织切片上检测单一指标难以研究两种分子靶标的共表达情况和相互关系。因此需要备多张组织切片才能完成对同一样本的多个分子靶标的检测。