[发明专利]PRMT2干扰慢病毒及其应用

说明书

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及PRMT2干扰慢病毒及其应用。本发明以PRMT2作为靶点设计干扰慢病毒，研究其在三阴性乳腺癌中的作用和机制。实验表明，干扰慢病毒PRMT2‑KD1和PRMT2‑KD2可下调PRMT2基因表达，抑制细胞迁移、侵袭及有氧糖酵解；通过PRMT2高表达质粒结合糖酵解抑制剂验证了PRMT2通过调控有氧糖酵解影响细胞的迁移和侵袭；动物实验表明PRMT2干扰慢病毒可抑制小鼠三阴性乳腺癌的肺转移。以上结果提示PRMT2可作为药物靶点用于三阴性乳腺癌转移的治疗。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及PRMT2干扰慢病毒及其应用。

背景技术

乳腺癌是常见的女性恶性肿瘤之一。据2020年全球癌症统计报告记载，乳腺癌新发病例约230万例。三阴性乳腺癌约占所有乳腺癌的15％，同时由于其雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和原癌基因Her-2均无表达，限制了现有乳腺癌治疗方法在治疗三阴性乳腺癌中的有效性，导致其预后差、复发转移率高、死亡率高。

有氧糖酵解，又称Warburg效应，是能量代谢重编程的重要依据和标志。在氧气充足条件下，肿瘤细胞仍通过低效的糖酵解代谢方式获取能量，目前肿瘤细胞的有氧糖酵解代谢被认为是抗癌治疗的新方向，深入研究肿瘤细胞糖代谢过程及调控，为肿瘤治疗提供新的作用靶点。

PRMT2是精氨酸甲基转移酶家族的成员，主要位于细胞质中，可作为转录辅助因子参与类固醇激素/核受体的转录活性。目前PRMT2的功能研究主要集中在乳腺癌和胶质母细胞瘤。研究发现高表达PRMT2可抑制乳腺癌的增殖和发展，但其在乳腺癌迁移侵袭的作用却有所不同，因此，探究PRMT2在乳腺癌转移中的作用及机制，可为以PRMT2作为药物靶点开发和制备治疗乳腺癌药物奠定基础。目前现有技术还没有以PRMT2为靶标的shRNA干扰慢病毒被用于三阴性乳腺癌转移的治疗及机制研究当中。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在提供PRMT2干扰慢病毒及其应用。

本发明提供了以PRMT2为靶标的shRNA，其核酸序列如SEQ ID NO.1所示，和/或SEQID NO.2所示。在本发明中，含有所述shRNA的PRMT2干扰慢病毒可下调宿主PRMT2基因表达，抑制细胞迁移、侵袭及有氧糖酵解；可通过调控有氧糖酵解影响细胞的迁移和侵袭；在裸鼠肺转移模型中，PRMT2干扰慢病毒组中肺组织的肿瘤结节数量显著下降，说明其可显著抑制小鼠三阴性乳腺癌的肺转移。其对宿主细胞PRMT2干扰效果优于其它shRNA的PRMT2干扰慢病毒。

本发明提供了重组载体，包括载体骨架，和/或如权利要求1所述的shRNA。

进一步的，本发明所述的载体骨架包括能够表达所述shRNA的具有蛋白表达必要元件的载体骨架。在一些实施例中，本发明以GV640载体为受试对象，对shRNA进行表达。

本发明中，所述的重组载体，还包括所述的shRNA以单个或重复串联形式形成的重组载体，本发明对此不做限定。

本发明提供了PRMT2干扰慢病毒，原料包括本发明所述的shRNA，和/或本发明所述的表达载体。

本发明提供了用于生产本发明所述的PRMT2干扰慢病毒的细胞。

进一步的，所述的细胞为工具细胞，所述的工具细胞包括但不限于：原代细胞、二倍体成纤维细胞及连续细胞系，它们可作为细胞工厂用于所述PRMT2干扰慢病毒的生产；更进一步的，所述的连续细胞系包括肿瘤细胞，可快速生产分裂。在本发明中，以293T细胞为细胞工厂，用于PRMT2干扰慢病毒的生产。

本发明提供了干扰慢病毒的构建方法，其利用本发明所述的PRMT2干扰慢病毒，和/或本发明所述的细胞制备干扰慢病毒。