[发明专利]胎盘间充质干细胞来源的胞外囊泡、制剂及其在制备抗卵巢早衰相关药物制剂中的应用

说明书

本申请公开了胎盘间充质干细胞来源的胞外囊泡、制剂及其在制备抗卵巢早衰相关药物制剂中的应用。该胞外囊泡，以WesternBlot方法检测结果计，高表达CD63、CD81、CD44、CD29、CD105、VEGF和HGF蛋白；以RT‑PCR检测计，所述胞外囊泡还高表达let‑7d、let‑7e和let‑7g三种miRNA。该胞外囊泡可能通过激活ERK 1/2通路控制颗粒细胞凋亡，同时促进其孕酮分泌，抵抗卵巢早衰。由此揭示了该类型胞外囊泡及其相关制剂能够应用于制备抗卵巢早衰的相关药物或制品中，具有十分广泛的应用前景。

技术领域

本申请涉及胞外囊泡技术领域，尤其涉及胎盘间充质干细胞来源的胞外囊泡、制剂及其在制备抗卵巢早衰相关药物制剂中的应用。

背景技术

间充质干细胞(MSCs)是一类具有自我更新和多向分化潜能的多能十细胞，因其独特的分化潜能、造血支持和免疫调控等特性，MSC已作为一种细胞治疗手段被广泛的应用于多种疾病。胞外囊泡(EVs)由细胞主动释放到细胞外环境中的纳米级膜性囊泡，EVs富含脂类、胞浆蛋白、核酸等物质，且其蛋白组成在一定程度上可以指示生物来源和分类。EVs已被证实广泛应用于药物载体、组织修复以及神经再生等领域。2009年BRUNO等通过复制甘油诱导的小鼠急性肾衰竭模型证实了MSC-EVs在急性肾损伤中的治疗潜力。此后MSC-EVs便被广泛的应用于多种组织损伤动物模型中。

然而，对于不同来源的MSCs的胞外囊泡分泌的调控，现有技术研究有限，尤其是对胞外囊泡发挥功能作用的蛋白大分子或小分子表达进行调控，以更好地发挥EVs作为细胞间传递相互作用，以及发挥对器官的修复、保护及治疗功能提供帮助，需要更深刻地挖掘MSCs的胞外囊泡的应用潜力。

发明内容

有鉴于此，本申请的目的在于至少提供一种新来源的胞外囊泡，以充分拓展其应用潜力。

第一方面，本申请实施例公开了胎盘间充质干细胞的胞外囊泡，以WesternBlot方法检测结果计，所述胞外囊泡高表达CD63、CD81、CD44、CD29、CD105、VEGF和HGF蛋白；以RT-PCR检测计，所述胞外囊泡还高表达let-7d、let-7e和let-7g三种miRNA。

在本申请实施例中，其平均径为264.3～389.0nm，PDI值为0.075～0.150。

第二方面，本申请实施例公开了第一方面所述的胞外囊泡的制备方法，包括以下步骤：

获得分离的原代胎盘间充质干细胞；

将所述原代胎盘间充质干细胞进行传代培养，得到第2代胎盘间充质干细胞；

将所述第2代胎盘间充质干细胞进行依次传代培养，得到其第5代或第6代的胎盘间充质干细胞培养物；

收集所述第5代或第6代的胎盘间充质干细胞培养物，分离纯化以得到所述胞外囊泡；

其中，传代培养过程中使得了包含雌二醇苯甲酸酯、霉酚酸酯和10-O-(2-L-甘氨酰)-银杏内醋B盐酸盐中的至少一种添加物的DMEM/F12培养液进行培养。

在本申请实施例中，其中传代培养为将所述第2代胎盘间充质干细胞培养物作为种子依次进行传代，传代培养中使用了的培养基包括第3代培养液、第4代培养液和第5代培养液；

所述第3代培养液为包含0.1～0.25μM雌二醇苯甲酸酯的DMEM/F12培养液；所述第4代培养液为包含0.15～0.35μM雌二醇苯甲酸酯和0.5～2μM霉酚酸酯的DMEM/F12培养液；所述第5代培养液为包含0.15～0.3μM雌二醇苯甲酸酯、4.0～7.5μM霉酚酸酯和10～15μg/mL 10-O-(2-L-甘氨酰)-银杏内醋B盐酸盐的DMEM/F12培养液。