[发明专利]一种基于DNA水凝胶的三聚氰胺检测方法及微流控芯片

权利要求书

1.一种基于DNA水凝胶的三聚氰胺检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.制备线性聚丙烯酰胺DNA聚合物单体：

将SA或SB与丙烯酰胺单体混合后真空脱氧，随后加入引发剂和催化剂混匀进行聚合反应，得到聚合物P-SA或P-SB；

所述SA和SB均为单链寡核苷酸，所述SA的3’端和所述SB的3’端分别与三聚氰胺适配体(MA)的两端完全互补配对，所述SA的5’端和所述SB的5’端功能化有甲基丙烯基；

S2.制备三聚氰胺响应DNA水凝胶：

将AuNPs、P-SA和P-SB在缓冲液中充分混合，随后加入MA混合均匀，使MA与P-SA中的SA和P-SB中的SB进行杂交，得到三聚氰胺响应DNA水凝胶；

S3.样品检测：

将所述三聚氰胺响应DNA水凝胶与待测样品混合，通过肉眼观察上清液颜色对样品中是否含有三聚氰胺进行定性检测；和/或，利用紫外分光光度计(UV-Vis)测量释放出AuNPs的紫外吸收峰对样品中的三聚氰胺进行定量检测；

和/或，

采用微流控芯片进行检测，所述微流控芯片包括依次连通的储液区、反应区、液体通道和检测区，所述液体通道为蛇形且其尺寸小于未反应的DNA水凝胶；检测方法包括：将所述三聚氰胺响应DNA水凝胶与待测样品注入微流控芯片的反应区中，一段时间后倾斜芯片，未经反应的DNA水凝胶会堵塞液体通道，经过反应的样本共聚液依靠重力作用流经液体通道至下方的检测区；通过肉眼观察DNA水凝胶在微流控芯片中的位置和颜色对样品中是否含有三聚氰胺进行定性检测；和/或，测定样本溶液颜色的变化对样品中的三聚氰胺进行定量检测。

2.根据权利要求1所述的基于DNA水凝胶的三聚氰胺检测方法，其特征在于，SA和SB的长度各自独立地为15-20nt；MA的长度为30-40nt；

MA的两端与SA和SB的一端完全互补配对的长度各自独立地为10-18nt。

3.根据权利要求2所述的基于DNA水凝胶的三聚氰胺检测方法，其特征在于，SA的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示，SB的核苷酸序列为SEQ ID NO：2所示，MA的核苷酸序列为SEQID NO：3所示。

4.根据权利要求1所述的基于DNA水凝胶的三聚氰胺检测方法，其特征在于，所述引发剂为APS，所述催化剂为TEMED。

5.根据权利要求1所述的基于DNA水凝胶的三聚氰胺检测方法，其特征在于，步骤S1还包括纯化步骤：对聚合反应产物进行超滤离心管离心纯化，除去未聚合的单体及分子量较小的聚合物；

步骤S2还包括纯化步骤：冲洗杂交所得DNA水凝胶，去除聚合物表面的AuNPs。

6.根据权利要求1所述的基于DNA水凝胶的三聚氰胺检测方法，其特征在于，所述AuNPs粒子的平均粒径为10-30nm。

7.根据权利要求1所述的基于DNA水凝胶的三聚氰胺检测方法，其特征在于，步骤S2包括：将4-10μL，0.4-0.6mg/mL的AuNPs、3-6μL以SA计为100μM的P-SA和3-6μL以SB计为100μM的P-SB于pH7.5的Tris-HCl缓冲液中混合后在55-65℃剧烈摇动4-8min，随后加入3-6μL，38-42μM的MA在55-65℃条件下剧烈摇动8-12min，确保混合均匀；缓慢冷却至室温后，用Tris-HCl缓冲液冲洗制备好的DNA水凝胶去除聚合物表面的AuNPs，得到三聚氰胺响应DNA水凝胶。

8.根据权利要求1所述的基于DNA水凝胶的三聚氰胺检测方法，其特征在于，测定样本溶液颜色的变化对样品中的三聚氰胺进行定量检测的步骤包括：在外部光照一定的条件下，利用手持拍照设备对芯片的检测区进行拍照并上传ImageJ软件进行平均灰度值分析实现定量检测。