[发明专利]一种通过光镊捕获膜纳米管内的转运颗粒实时测定马达蛋白力学参数的方法

权利要求书

1.一种通过光镊捕获膜纳米管内的转运颗粒实时测定马达蛋白力学参数的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)对宿主细胞的微丝、微管和马达蛋白进行荧光标记；

(2)选用通过量子点或荧光染料修饰的粒子作为转运颗粒；

(3)调节宿主细胞的密度控制细胞间膜纳米管的生成，显微镜明场下观察细胞间的膜纳米管的位置；

(4)利用转运颗粒侵染宿主细胞，转运颗粒会在宿主细胞间的膜纳米管内沿微丝或微管通过马达蛋白转运；

(5)使用共聚焦成像技术对膜纳米管内转运颗粒的转运过程进行实时成像，同时对转运颗粒附近的马达蛋白进行实时示踪；

(6)使用光镊对膜纳米管内的转运颗粒进行捕获，并根据动态示踪和实时测定的力谱信息，结合转运颗粒的光阱刚度，得到马达蛋白在货物转运过程中的力学参数。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述宿主细胞为能够在细胞之间形成膜纳米管，并能实现转运颗粒在其中转运的所有细胞系。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述宿主细胞包括非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)、人宫颈癌(HeLa)细胞、人肺癌A549细胞、人支气管上皮细胞(HBE细胞)、狗肾上皮细胞(MDCK细胞)。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述马达蛋白为细胞内线性行进性马达蛋白分子。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述马达蛋白包括驱动蛋白、动力蛋白和肌动蛋白。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，荧光标记为通过荧光蛋白或染料进行荧光标记。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述粒子包括病毒粒子、麦胚凝集素和聚苯乙烯微球。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(6)中，所述力谱信息为转运颗粒受马达蛋白的作用而偏离光阱中心的相对位置。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(6)中，所述光阱刚度采用功率谱密度法得到。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(6)中，所述力学参数包括发力大小、步距和移动速度。