[发明专利]一种基于受体-抗体夹心的Cry毒素检测方法

权利要求书

1.一种基于受体-抗体夹心的Cry毒素检测方法，其特征在于，所述Cry毒素包括Cry1Ab、Cry1Ac、Cry2Aa和Cry2Ab，其具体检测方法如下：

1）使用包被液将棉铃虫钙黏蛋白毒素结合区片段稀释为0.3-10µg/mL，4˚C包被过夜；

2）次日，PBST洗板，每孔加入封闭液250µL，37℃反应1h；

3）PBST洗板，每孔加入待测样品100µL，37℃反应1h；

4）PBST洗板，向酶标板中分别加入Cry2Aa兔多克隆抗体和Cry1Ab兔多克隆抗体，加入量均为100µL/孔，37℃反应1h；

5）PBST洗板，加入稀释后的HRP标记的羊抗兔抗体，每孔100µL，37℃反应1h；

所述稀释后的HRP标记的羊抗兔抗体是指，利用PBS稀释浓度为5mg/mL的HRP标记的羊抗兔抗体，稀释比例为1：5000；

6）PBST洗板，加入显色液，每孔100µL，37℃反应15min；

7）加入终止液，每孔50µL，轻微震荡混匀，使用酶标仪测定OD₄₅₀值，带入标准线性方程计算出Cry毒素的残留量；

其中，Cry1Ab毒素线性方程为：Y=4.219*X-0.03659；

Cry1Ac毒素线性方程为：Y=2.355*X+0.02928；

Cry2Aa毒素线性方程为：Y=1.037*X + 0.2214；

Cry2Aa毒素线性方程为：Y=1.037*X + 0.2214。

2.根据权利要求1所述基于受体-抗体夹心的Cry毒素检测方法，其特征在于，步骤3）所述待测样品是这样获得的：

若待检测的样品为谷物，则首先将样品研磨后过120目筛，获得样品粉末；然后取10 mg样品粉末加入1mL的提取液，混合均匀后，10000rpm离心20min，其上清液即为所述待测样品；

若待检测的样品为植物叶片，收首先将待检的样品剪切至1mm²大小的碎片，然后冷冻干燥处理24h，获得样品碎片；称取5mg的样品碎片，加入1mL的提取液溶解，混合均匀后，10000rpm离心20min，其上清液即为所述待测样品。

3.根据权利要求2所述基于受体-抗体夹心的Cry毒素检测方法，其特征在于，所述谷物包括大米、小麦、玉米中的至少一种；所述植物叶片包括水稻叶片、小麦叶片、玉米叶片、玉米桔梗中的至少一种。

4.根据权利要求2所述基于受体-抗体夹心的Cry毒素检测方法，其特征在于，步骤1）所述包被液为pH 为9.6的CBS溶液。

5.根据权利要求2所述基于受体-抗体夹心的Cry毒素检测方法，其特征在于，步骤2）所述封闭液为含有5%脱脂奶粉的10mM pH7.4的PBS溶液。

6.根据权利要求2所述基于受体-抗体夹心的Cry毒素检测方法，其特征在于，步骤7）所述终止液为浓度为2M的H₂SO₄。