[发明专利]一种用于阿尔茨海默症的均相免疫检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于阿尔茨海默症的均相免疫检测试剂盒，属于生物检测技术领域。通过稀释降低高丰度蛋白和非特异干扰物质的影响，同时采用比其他仪器样本量多50‑100倍的样本量，通过富集血液中的抗原，提升灵敏度。通过富集的方法可以使用速度快的全自动生化分析仪检测，无需购买昂贵的专用仪器检测该项目。采用均相免疫的免洗反应，当半酶标记双抗体和待检抗原结合后，由于半酶的空间接近会互补结合形成有活性的酶，再利用多酶偶联放大效应，增强催化底物的效应，产生显色效应，因此抗原通过酶活性的变化定量待检物质。该方法可提高检测的灵敏度和特异性。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种用于阿尔茨海默症的均相免疫检测试剂盒。

背景技术

诊断阿尔茨海默氏病(AD)需要综合症状，体征，心理测试和生物标志物测量值。在临床实践和临床实践中，建议使用正电子发射断层扫描(PET)成像以及脑脊液(CSF)中的Ab42，T-Tau和P-T181-Tau浓度作为该疾病的诊断生物标志物。然而，PET的昂贵成本限制了其在临床中的应用。CSF被认为是AD生物标志物的最佳来源，因为CSF与大脑直接接触可以使其反映中枢神经系统(CNS)中发生的病理生理变化。脑脊液中的Ab42与大脑的尸体解剖和PET图像中的病理变化具有高度相关性，确认其对AD诊断的有效性。但是，腰椎穿刺是一种侵入性手术，并且重复收集CSF具有挑战性。与CSF相比，血液测量对AD生物标志物筛查是有利的这些发现表明，外周血可能仍然是筛选AD生物标志物的有希望的来源。此外，研究表明，血液神经元外来体中的Ab42，T-Tau和P-T181-Tau P-T217-Tau可以将AD患者与对照患者区分开。Tau蛋白是存在于正常脑组织中的磷酸蛋白，是微管相关蛋白的一种。微管系统在细胞间物质运输和信号传递中发挥重要的作用。研究发现，在阿尔兹海默症发病早期，患者脑组织中的Tau蛋白通常会发生异常磷酸化并堆积，Tau蛋白总量明显增多。过度磷酸化的Tau蛋白极大地干扰了微管系统的正常运行，使正常轴突转运受损，引起突触丢失和神经元损伤，导致脑神经退行性病变。因此检测Tau蛋白的含量有助于阿尔兹海默症的早期诊断，降低患病风险。

用于检测生物体液中Tau的免疫测定和超灵敏平台。已经在脑脊液和血浆中测试并广泛验证了几种分析方法。在目前Tau生物标志物领域最常用的检测方法检测列表包括(1)标准和第二代ELISA(INNOTEST、EUROMLUN、Elecsys)，(2)单分子酶联免疫吸附检测(SiMoA)，(3)质谱分析，根据测定的灵敏度，检测范围从几pg/mL到fg/mL。EUROIMLUN和Elecsys是自动化的第二代免疫检测。最初的测试基于ELISA(酶联免疫吸附试验)，但结果充其量只是模棱两可的在这些早期尝试中，血浆蛋白的干扰可能很重要。ELISA已经被逐渐改善，达到更高的灵敏度，以及其他平台已经被开发，包括SiMoA(单分子阵列)，质谱分析。为了克服血液的复杂性以及血液蛋白质和嗜异性抗体以及低浓度目标生物标志物的干扰

Simoa免疫分析是一种数字ELISA，通过以数字方式确定分析物浓度，而不测量总模拟信号。简单地说，当磁珠上形成免疫复合物后，磁珠被转移到数千个孔中，每个孔的大小只能容纳一个磁珠。通过将单个酶产生的荧光团限制在极小的体积内，可获得较高的荧光产物浓度。因此，即使珠子上仅存在单个复合物，也可检测到可读信号。通过分析仪计算含有酶标记珠的孔和含有珠的孔的数量，通过每个珠数的平均酶标值和标准曲线计算目标分析物的浓度。虽然Simoa具有较高的灵敏度，但应考虑检测器捕获过程中抗体组合等问题，尽量避免噪音信号，最大限度地提高分析性能。