[发明专利]一种丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法

说明书

本发明提供了一种丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法，该方法为：制备扩繁培养基，扩繁培养基上放置毛状根培养1个月后，然后在超净工作台中用手术刀切取含丛枝菌根真菌的扩繁培养基，涂抹在所述毛状根上，在温度为25℃的黑暗条件下条件下，培养两个月，得到子代共生丛枝菌根真菌的培养物，制备成丛枝菌根真菌离体双重培养物，当其为包含孢子和根段的固体复合物时，直接填入种植穴后，种植植物幼苗；当其为包含孢子、根段的悬浊液时，对植物幼苗进行浸种、蘸根或者沟施后，种植植物幼苗。本发明避免了只获取单纯丛枝菌根真菌孢子的流失率，最大限度上避免浪费。

技术领域

本发明属于丛枝菌根真菌技术领域，具体涉及一种丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法。

背景技术

丛枝菌根真菌是土壤中重要的微生物，能够与地球上80％的陆地植物共生，包括玉米、小麦、水稻等重要的农作物。在农业生产实践中发挥着重要的作用，但是丛枝菌根真菌是一种专性共生真菌，只能与植物共生才能繁殖，目前没有完全成熟高效的纯培养方法。其扩繁方法主要有盆栽培养法、培养基培养法、静止营养液培养法、流动营养液培养法、喷雾液培法、玻璃珠分室培养法、大田培养法以及丛枝菌根真菌与植物离体根器官的离体双重培养法。

主流生产方法中，离体双重培养是最为高效获得纯净孢子生产的方法。一个培养皿中可获得2万至3万颗孢子，远远胜过盆栽培养等方法，还没有杂菌污染，生长周期短，占据的空间小，目前应用的方式主要是将培养物溶解打碎处理，只获取孢子进行保存。有以下缺点：

1.溶解，打碎提取纯孢子的过程中浪费，流失了大量孢子。

2.纯孢子提取出后，不易保存，容易污染。

3.造成大量的资源浪费，培养物中包含大量的根系，次生代谢物质和剩余的营养元素。

4.操作步骤复杂，不容易操作。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法，该方法避免了获取单纯丛枝菌根真菌孢子过程中的流失率，最大限度上避免浪费。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法，该方法为：

S1、母代扩繁培养基的制备：所述母代扩繁培养基由以下原料制成：MgSO₄·7H₂O0.73g、KNO₃0.076g、KCl 0.065g、Ca(NO₃)₂·4H₂O 0.35g、MES缓冲剂2.13g、蔗糖10g、MSR微量元素溶液1mL、MSR铁盐溶液10mL，加水定容至1L，将pH值调至5.8后，加入植物凝胶Phytagel，121℃高温灭菌后，加入维生素溶液1mL；所述植物凝胶Phytagel的终浓度为3.5g/L；

S2、母代共生丛枝菌根真菌的培养物的制备：

在S1中得到的母代扩繁培养基上放置毛状根培养1个月后，放入丛枝菌根真菌，在温度为25℃的黑暗条件下条件下培养至产孢，得到母代共生丛枝菌根真菌的培养物；

S3、扩繁培养基的制备：所述扩繁培养基由以下原料制成：MgSO₄·7H₂O 0.73g、KNO₃0.076g、KCl 0.065g、Ca(NO₃)₂·4H₂O 0.35g、MES缓冲剂2.13g、蔗糖10g、MSR微量元素溶液1mL、MSR铁盐溶液10mL，加水定容至1L，将pH值调至5.8后，加入植物凝胶Phytagel，121℃高温灭菌后，加入维生素溶液1mL、滤液5mL；所述植物凝胶Phytagel的终浓度为3.5g/L；