[发明专利]一种具有自絮凝活性的胶状红长命菌JD21及其应用在审
申请号: | 202210718277.2 | 申请日: | 2022-06-23 |
公开(公告)号: | CN115725435A | 公开(公告)日: | 2023-03-03 |
发明(设计)人: | 李哲;封佳丽;王雯雯 | 申请(专利权)人: | 山东省科学院生物研究所;中国科学院生态环境研究中心 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12N1/02;C02F3/34;B01D53/84;C12R1/01;C02F103/20;C02F101/38;C02F101/36 |
代理公司: | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人: | 王志坤 |
地址: | 250014 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 具有 絮凝 活性 胶状 长命 jd21 及其 应用 | ||
1.一种胶状红长命菌(Rubrivivax gelatinosus)JD21,其特征在于,所述胶状红长命菌(Rubrivivax gelatinosus)JD21从黄河三角洲区域的湿地底泥沉积物中分离,2022年6月15日保藏于中国典型培养物保藏中心,编号为CCTCC M 2022889。
2.一种权利要求1所述的胶状红长命菌(Rubrivivax gelatinosus)JD21的分离方法,其特征在于,所述分离方法步骤如下:
(1)取20mL沉积淤泥,加入60mL MPYE培养基,加入液体石蜡以隔绝空气,置于光照恒温培养箱中静置厌氧培养得到红色富集培养液;取10mL红色富集培养液加到含新灭菌的90mL培养基中,再加入液体石蜡静置厌氧培养至培养液变红,以上步骤重复;直到镜检发现大量的优势菌种呈杆形、球形或椭圆形细菌为止;
(2)取富集培养液1mL,用0.9%的生理盐水进行10倍稀释,用双层培养基平板法分离单菌落,用接种环蘸取稀释后的富集培养菌液在固体培养基上划线接种,然后再倒一层已灭菌的2%琼脂的MPYE培养基,冷却凝固后在30℃和光照3 000lx条件下倒置培养7d;待红色菌落长出后,挑单菌落于相同固体培养基平板上划线接种再分离纯化培养7d,获得单一菌种的JD21单菌落,并在MPYE液体培养基中于30℃和光照3 000lx条件下进行扩大培养,得到JD21菌液。
3.根据权利要求2所述的分离方法,其特征在于,静置厌氧培养的培养基配方为:蛋白胨3g/L、酵母膏3g/L、1M MgCl2 1.6mL/L、1M CaCl2 1.6mL/L。
4.根据权利要求2所述的分离方法,其特征在于,静置厌氧培养中培养条件:光源为日光灯,光照强度2 000~5 000lx,温度30℃;富集静置培养10-15d,直至培养液呈红色。
5.根据权利要求2所述的分离方法,其特征在于,所述双层培养基均为含2%琼脂的MPYE固体培养基。
6.一种微生物絮凝剂的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括如下步骤:
通过平板划线将JD21接种于MPYE平板活化,挑取单菌落于MPYE液体培养基中,在30℃和光照3 000lx条件下进行厌氧静置培养,收集为种子液,将种子液按照10%的接种比例进行扩大培养,30℃和光照3 000lx条件下扩大培养7d;收集发酵液低温离心,收集菌体于无菌试管中;加入等体积的4℃预冷的生理盐水重悬菌体,混匀后于低温离心;然后加入3倍体积的4℃预冷无水乙醇,低温离心,收集絮凝沉淀物,随后低温真空干燥收集絮凝剂粗品;
按絮凝剂粗品、无菌水1比100的体积比将絮凝剂粗品溶解,加入3倍体积的4℃预冷无水乙醇,4℃静置12h后,低温离心,取沉淀物溶于4℃预冷的生理盐水,低温离心,最后低温真空干燥得到絮凝剂纯品。
7.根据权利要求6所述制备方法,其特征在于,所述低温离心的条件均为4℃和5000r/min条件下离心10min。
8.根据权利要求6所述制备方法,其特征在于,所述低温真空干燥均为4℃条件下真空干燥10h。
9.一种如权利要求6-8任一项所述制备方法制备得到的微生物絮凝剂。
10.如权利要求1所述胶状红长命菌(Rubrivivax gelatinosus)JD21或权利要求9所述微生物絮凝剂在处理废水、染料脱色、去除异味中的应用;
优选的,所述废水包括养殖污水;
优选的,所述染料废水包括孔雀石绿、结晶紫、偶氮红、活性黑、溴酚蓝、刚果红;
优选的,所述异味包括畜禽养殖产生的异味。
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