[发明专利]一种改良繁殖金果榄试管苗的方法

说明书

本发明涉及一种改良快速繁殖金果榄试管苗的方法。具体步骤是：(1)选取外植体；(2)外植体消毒；(3)一步法增殖培养；(4)生根培养；(5)炼苗和移栽。通过本发明提供的方法，一步法增殖培养最佳培养基配方是MS+0.2mg/LTDZ+0.02mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L琼脂，生根培养最佳培养基配方是1/2MS+0.2mg/L IBA+30g/L蔗糖+8g/L琼脂，该方法为快速繁殖金果榄试管苗的改良方法，具有步骤简易，增殖速度快，种苗整齐健壮，变异率低，污染少，移栽成活率高，生产成本低等优势。

技术领域

本发明属于植物育种领域，具体而言，本发明涉及一种改良的快速繁殖金果榄试管苗的方法。

背景技术

金果榄(Tinospora capillipes Gagnep.)为防己科青牛胆属(Tinospora)药用植物中的一种，以干燥块根入药，含青牛胆苦素、古伦宾、异古伦宾、巴马汀、巴马士宾亭等多种化学成分，具有清热解毒、利咽、止痛的功效，是治疗咽喉肿痛、胃炎的特效药。现代药理研究表明，金果榄及其制剂具有抗幽门螺杆菌、抑菌、降血糖、抗肿瘤等作用，被专家誉为“可代替抗生素的天然药物”。然而，多年来金果榄的药材来源皆是依靠挖掘野生资源，以致野生资源日趋枯竭。

中国专利申请CN104472364A公开了一种金果榄叶片成苗的快速繁育方法，其中组织培养需要先分化获得丛生芽、再壮苗、然后生根获得带根苗等三步骤。潘丽梅等的论文(药用植物金果榄组织培养初探.湖北农业科学，2015年)公开了一种金果榄组织培养的方法，其中也需要启动、增殖和生根等三步骤进行。

另外，在众多植物激素中，TDZ(噻苯隆)在组织培养中应用很少，通常是在棉桃显著开裂后用作为棉花种植上的落叶剂。

在没有现有技术启示的情况下，本发明人意外地发现，通过TDZ的使用，能够一步法增殖培养金果榄外植体，组织培养过程中只需要一次转接，降低了污染率，提高了存活率，减少了人工使用，缩短了组培时间，因而获得了具有快速、低成本、生产稳定、种苗规格一致等优点的快速繁殖金果榄组培苗的方法，可用于解决当下金果榄药材供不应求的现状。另外，本发明人长期研究发现，金果榄腋芽结构很容易吸纳污染物，因而用水长时间清洗是有必要的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种改良繁殖金果榄试管苗的方法，以获得组培步骤简易、周期短、苗粗根壮、移栽存活率高，适合规模化生产的金果榄组培苗。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种改良的快速繁殖金果榄组培苗的方法，包括以下步骤：

(1)选取外植体：取无病斑、无虫瘿健康金果榄当年生嫩茎，放入烧杯中，自来水冲洗1小时；

(2)外植体消毒：上述嫩茎经常规消毒，即75％酒精消毒30秒，0.1％升汞消毒10min，切成含腋芽的小段；

(3)一步法增殖培养：将所述小段接种至增殖培养基上进行培养，使得金果榄腋芽生长成无根小苗且在茎节处产生丛生芽；其中，增殖培养基为：MS基础培养基+噻苯隆(TDZ)0.1～0.4mg/L+萘乙酸(NAA)0.01～0.02mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，pH为5.8～6.0；

(4)生根培养：将增殖的丛生芽分成单株，接种到生根培养基上，进行生根培养；其中，生根培养基为：1/2MS基础培养基+吲哚丁酸(IBA)0.1～0.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，或者1/2MS基础培养基+萘乙酸(NAA)0.1～0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，pH均为5.8～6.0；

(5)炼苗和移栽：选取3-4cm高，有3-4条根的金果榄成苗移到温室中，驯化培养1周，用水冲洗去除培养基后，将金果榄成苗移栽到铺有营养土的苗床上，并小拱棚内遮阴保湿，两月后即可进行大田移栽。