[发明专利]紫花苜蓿MsMYB基因在提高植物抗倒伏能力中的应用

权利要求书

1.紫花苜蓿的MsMYB基因在提升植物抗倒伏能力中的应用，其特征在于，所述MsMYB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用是利用MsMYB基因获得转基因植物，以提高植物抗倒伏能力。

3.一种含有权利要求1所述MsMYB基因的重组载体在提升植物抗倒伏能力中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述重组载体是将MsMYB基因重组到pBI121质粒上。

5.一种含有权利要求3所述重组载体的重组表达转化体在提升植物抗倒伏能力中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述重组表达转化体的宿主为农杆菌。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的应用，其特征在于，所述植物为烟草。

8.一种提高烟草抗倒伏能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)构建重组载体：将MsMYB基因重组到pBI121质粒上，获得重组载体pBI121-MsMYB，所述MsMYB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

(2)制备携带MsMYB基因的农杆菌：将步骤(1)得到的重组载体pBI121-MsMYB转入到农杆菌感受态中进行培养，得到携带MsMYB基因的农杆菌；

(3)获得携带MsMYB基因的转基因烟草：培养烟草种子到成苗期，对烟草苗进行预培养处理，然后用步骤(2)中得到的农杆菌侵染经预培养处理后的烟草苗，再经过芽诱导、生根诱导和移栽驯化，得到携带MsMYB基因的转基因烟草。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述重组载体的构建方法具体为利用限制性内切酶分别酶切载体pMD18T-MsMYB和pBI121质粒，得到MsMYB基因的序列片段与pBI121质粒的酶切产物，然后将MsMYB基因的序列片段与pBI121质粒的酶切产物进行连接反应，得到的重组载体pBI121-MsMYB。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述侵染的具体步骤如下：

1)将携带MsMYB基因的农杆菌涂布于含有卡那霉素、链霉素和利福平的YEB固体培养基上，在28℃条件下，培养48h；

2)利用1/2MS液体培养基重悬步骤1)得到的农杆菌的菌落，得到农杆菌的菌液，再用1/2MS液体培养基将菌液稀释至OD₆₀₀值为0.4-0.6；

3)取烟叶叶片，在步骤2)得到的农杆菌的菌液中侵染6min-7min，将烟草叶片取出放置于无菌滤纸上，吸去附着的菌液，放置于MS1培养基上，在黑暗条件下培养2天。