[发明专利]一种通过脂肪酸代谢调控提高抗菌脂肽bacillomycin D产量的方法

权利要求书

1. 一种通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycin D发酵产量的方法，其特征在于，以能够合成bacillomycin D的芽孢杆菌为生产菌株，在添加了脂肪酸和/或脂肪酸盐的基础发酵培养基中发酵，优选的，所述脂肪酸为丙酸或丁酸，所述脂肪酸盐为丙酸钠，添加量在0.25~5 mmol/L。

2.根据权利要求1所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycin D发酵产量的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌或解淀粉芽孢杆菌。

3.根据权利要求2所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycin D发酵产量的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）fmbJ，由南京农业大学酶工程实验室自主筛选所得，菌种保藏号为CGMCC No.0943。

4.根据权利要求1所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycin D发酵产量的方法，其特征在于，在发酵起始前，向灭菌的发酵培养基中添加脂肪酸和/或脂肪酸盐，添加终浓度为0.25~5 mmol/L。

5.根据权利要求4所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycin D发酵产量的方法，其特征在于，所述丙酸钠、丙酸的最适添加量在2.5 mmol/L。

6.根据权利要求4所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycin D发酵产量的方法，其特征在于，所述丁酸的最适添加量在0.25 mmol/L。

7.根据权利要求1-6任一所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycin D发酵产量的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌活化后接种到种子培养基，再将种子液接入发酵培养基，发酵条件为33 ℃，180 rpm，发酵时间为72-120 h。

8.根据权利要求7任一所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycin D发酵产量的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

（1）菌种活化：将枯草芽孢杆菌在LA培养基上进行划线，置于37 ℃恒温培养箱静置培养12-16 h，挑单菌落于LB培养基中，37 ℃，180 rpm过夜活化；

（2）种子培养：将活化后的菌液接入种子培养基，37 ℃，180 rpm培养至OD₆₀₀达到0.8-1.0；

（3）发酵培养：用滤膜将脂肪酸过滤除菌，加入灭菌的发酵培养基，调整pH至7.0±0.2，然后将种子液接种到各组发酵培养基中，33 ℃，180 rpm发酵72-120 h；

（4）产物检测：将发酵液离心，收集上清液；调整上清液pH至2.0，4 ℃静置过夜；离心弃上清，收集沉淀，重悬，调整重悬液pH至7.0，超声处理50 min，离心取上清获得bacillomycin D粗提液；粗提液过直径0.22 μm的滤膜，通过分析型高效液相色谱对粗提液中的bacillomycin D进行定量检测，即可。

9.权利要求1-8任一所述的通过脂肪酸代谢调控提高bacillomycin D发酵产量的方法在bacillomycin D生产方面的应用。