[发明专利]一种培养液及分离和体外培养小鼠附睾上皮细胞的方法

权利要求书

1.一种用于培养小鼠附睾上皮细胞的培养液，其特征在于，所述培养液为RPMI 1640工作液，其成份包括RPMI 1640基础培养液、丙酮酸盐、胰岛素、氢化可的松、转铁蛋白、视黄醇乙酸酯、二氢睾酮、睾酮、胎牛血清、抗生素和成纤维抑制剂。

2.根据权利要求1所述的一种用于培养小鼠附睾上皮细胞的培养液，其特征在于，其各个成份的浓度分别为1mM、100nM、200nM、5μg/mL、1μg/mL、1μM、200nM、10％、1％和30μg/mL。

3.基于权利要求1或2任一所述培养液的分离和体外培养小鼠附睾上皮细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：获取小鼠头部、体部和尾部三个不同区段的附睾组织，利用胰蛋白酶消化液和胶原蛋白酶I消化液分别消化不同区段的小鼠附睾组织，进而分离附睾上皮细胞，然后分别对不同区段附睾上皮细胞进行差速贴壁培养。

4.根据权利要求3所述的一种分离和体外培养小鼠附睾上皮细胞的方法，其特征在于，消化步骤包括：向获取的小鼠附睾组织中加入胰蛋白酶消化液，消化若干分钟；加入等量的含有胎牛血清培养液终止消化，去上清；加入胶原蛋白酶I消化液，连续消化若干小时，离心后去上清，得到分离后的附睾上皮细胞。

5.根据权利要求4所述的一种分离和体外培养小鼠附睾上皮细胞的方法，其特征在于，胰蛋白酶的消化时间不超过10min。

6.根据权利要求4所述的一种分离和体外培养小鼠附睾上皮细胞的方法，其特征在于，胶原蛋白酶I的消化时间不超过2小时。

7.根据权利要求4所述的一种分离和体外培养小鼠附睾上皮细胞的方法，其特征在于，消化的温度和环境为37℃，5％CO₂培养箱中。

8.根据权利要求3所述的一种分离和体外培养小鼠附睾上皮细胞的方法，其特征在于，胰蛋白酶消化液的成份包括：RPMI1640基础液、浓度为0.25％的Trypsin、浓度为0.02％的EDTA-2Na、浓度为1μg/mL的DNase I和浓度为100U/mL的青链霉素。

9.根据权利要求3所述的一种分离和体外培养小鼠附睾上皮细胞的方法，其特征在于，胶原蛋白酶I消化液的成份包括：RPMI1640基础液、浓度为1mg/mL的胶原蛋白酶I、浓度为1μg/mL的DNase I和浓度为100U/mL的青链霉素。

10.根据权利要求3所述的一种分离和体外培养小鼠附睾上皮细胞的方法，其特征在于，培养步骤为：向分离后的附睾上皮细胞中加入RPMI 1640工作液，将细胞悬液混匀后接种到孔板中，并置于培养箱中。