[发明专利]一类ICCG融合蛋白及其在降解聚对苯二甲酸乙二醇酯中的应用

权利要求书

1.一类ICCG融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由角质酶ICCG、连接肽和锚定肽依次相连而得；连接肽包括(GGGGS)₂、(GGGGS)₄、GSA或17X；锚定肽包括αSP或TA2。

2.如权利要求1所述的ICCG融合蛋白，其特征在于，融合蛋白包括以下几种：ICCG-(GGGGS)₂-αSP、ICCG-(GGGGS)₄-αSP、ICCG-GSA-αSP、ICCG-17X-αSP、ICCG-(GGGGS)₂-TA2、ICCG-(GGGGS)₄-TA2、ICCG-GSA-TA2、ICCG-17X-TA2。

3.权利要求1的一类ICCG融合蛋白在降解聚对苯二甲酸乙二醇酯中的应用，其特征是，包括如下步骤：

1)采用重叠延伸聚合酶链式反应将ICCG的基因分别通过(GGGGS)₂、(GGGGS)₄、GSA或17X连接肽基因与锚定肽αSP基因或TA2基因的N端融合得到重组基因ICCG-(GGGGS)₂-αSP、ICCG-(GGGGS)₄-αSP、ICCG-GSA-αSP、ICCG-17X-αSP、ICCG-(GGGGS)₂-TA2、ICCG-(GGGGS)₄-TA2、ICCG-GSA-TA2、ICCG-17X-TA2；

2)将步骤1)中融合得到的重组基因亚克隆到质粒载体(pColdⅡ)的NdeⅠ和XhoⅠ的限制性酶切位点之间，并化转到感受态细胞大肠杆菌BL21(DE3)中得到上述融合蛋白的基因工程菌株；

3)诱导表达上述获得的融合蛋白的基因工程菌株，超声破碎并离心收集细胞溶解物，利用镍离子金属螯合亲和色谱柱纯化重组蛋白，最后经高浓度咪唑缓冲液洗脱得到融合蛋白ICCG-(GGGGS)₂-αSP、ICCG-(GGGGS)₄-αSP、ICCG-GSA-αSP、ICCG-17X-αSP、ICCG-(GGGGS)₂-TA2、ICCG-(GGGGS)₄-TA2、ICCG-GSA-TA2、ICCG-17X-TA2；

4)将获得的上述ICCG的融合蛋白分别置于含有PET材料的K₂HPO₄/KH₂PO₄缓冲液中，然后将反应体系置于水浴摇床中进行PET的降解反应。

4.如权利要求3所述的方法，其特征是，ICCG基因序列为SEQ ID NO.1；锚定肽αSP基因序列为SEQ ID NO.2；锚定肽TA2基因序列为SEQ ID NO.3；连接肽(GGGGS)₂基因序列为SEQID NO.6；连接肽(GGGGS)₄基因序列为SEQ ID NO.8；连接肽NL基因序列为SEQ ID NO.9；连接肽GSA基因序列为SEQ ID NO.10；连接肽17X基因序列为SEQ ID NO.11。

5.如权利要求3所述的应用，其特征是，重组基因ICCG-(GGGGS)₂-αSP的序列为SEQ IDNO.12；重组基因ICCG-(GGGGS)₄-αSP的序列为SEQ ID NO.13；重组基因ICCG-GSA-αSP的序列为SEQ ID NO.14；重组基因ICCG-17X-αSP的序列为SEQ ID NO.15；重组基因ICCG-(GGGGS)₂-TA2的序列为SEQ ID NO.16；重组基因ICCG-(GGGGS)₄-TA2的序列为SEQ IDNO.17；重组基因ICCG-GSA-TA2的序列为SEQ ID NO.18；重组基因ICCG-17X-TA2的序列为SEQ ID NO.19。

6.如权利要求3所述的应用，其特征是，重组基因亚克隆到质粒pColdⅡ序列为SEQ IDNO.23，重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中。