[发明专利]一种动物源性食品中孟布酮残留检测方法

说明书

本发明提供了一种动物源性食品中孟布酮残留检测方法,一种动物源性食品中孟布酮残留检测方法，具体步骤如下：S1试样的制备；S2试样的称量和提取；S3净化；S4 LC‑MS/MS检测。通过本发明的技术方案，1.确定了孟布酮在猪油、猪肉及猪肝中的提取和净化方法；2.确定了孟布酮在HSS PFP色谱柱上最佳洗脱溶剂及洗脱梯度；3.确定了孟布酮在串联质谱仪的离子碎片信息，及最佳质谱参数；4.采用高效液相色谱串联质谱仪检测动物源性基质中孟布酮残留，该方法灵敏度高，重复性好，专属性好，检测效率高，为控制动物性食品中孟布酮的残留量提供可靠方法。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，具体而言，特别涉及一种动物源性食品中孟布酮残留检测方法。

背景技术

孟布酮 (Menbutone) 是一种动物专用利胆剂，能够促进胆汁、胃液和胰液的分泌， 从而使胆酸盐、胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶等的供应量增加，有效治疗动物的消化不良、食欲不振、便秘腹胀等胃肠机能障碍，改善消化、吸收功能。在欧洲，孟布酮已被应用于猪、牛、绵羊、山羊、马、狗的消化不良、厌食、便秘、毒血症、肝脏和胰腺功能不全所致的消化机能障碍，治疗效果良好。2020年3月23号中华人民共和国农业农村部第284号公告中对孟布酮核发了新兽药注册证书，并发布了产品质量标准、最高残留限量（MRLs：40μg/kg）及残留检测液相色谱法。

研究表明，孟布酮在体内主要以原型滞留在肌肉、脂肪、肝脏和肾脏中。由于孟布酮在体内消除迅速，临床主要用于并不立即宰杀的动物，故欧盟兽药委员会认为没有必要规定孟布酮的最高残留限量(MRL)。但全球对兽药残留要求最严的日本发布并规定了孟布酮在猪的肌肉、脂肪、肝脏、肾脏中的最高残留限量(MRL) 均为40μg/kg。目前，国内动物源性食品中孟布酮残留检测的方法是高效液相色谱紫外检测器检测，该方法前处理复杂、繁琐，仪器灵敏度差，样品需要经过固相萃取净化，才能检测。有鉴于此，本发明的目的在于提供采用高效液相色谱串联质谱检测动物源性食品中孟布酮残留的方法，利用该方法能够准确、快速检测猪组织中孟布酮的残留。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明提供了一种动物源性食品中孟布酮残留检测方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：一种动物源性食品中孟布酮残留检测方法，具体步骤如下：

S1试样的制备：选取样品组织，切碎缩分后绞碎，冷冻存储待测；

S2试样的称量和提取：称取试样至离心管内，加入乙腈，涡旋混合，振荡提取后取出，离心；移取上清液到另一塑料离心管内；残渣中加入乙腈重复提取一次，合并乙腈层；

S3净化：加入正己烷，涡旋离心，把正己烷层弃去；

S4 LC-MS/MS检测：在40℃水浴下，用氮气把提取液吹干，1mL30%乙腈超声溶解残渣，过0.22μm有机系滤膜后，装入进样小瓶内，待LC-MS/MS检测；测得样品液中孟布酮的色谱峰面积，代入标准工作曲线，得到样品液中孟布酮含量，根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中孟布酮含量。

作为优选方案，步骤S1中选取样品组织为适量新鲜或解冻的样品组织，切碎缩分后绞碎，装入洁净的样品袋内-18℃冷冻存储待测。

作为优选方案，步骤S2中的称取试样1g（精确到0.01g）到15mL塑料离心管内，加入5mL乙腈，涡旋混，在高速组织研磨机上13000r/min振荡提取2min；取出，转速8000r/min，离心3min；移取上清液到另一15mL塑料离心管内；残渣中加入5ml乙腈重复提取一次，合并乙腈层。

作为优选方案，步骤S3中的加入5mL正己烷，涡旋1min，转速8000r/min，离心3min，把正己烷层弃去。

作为优选方案，还包括S5空白试验：不称取试样的情况下，重复S2至S4。

作为优选方案，标准工作曲线的配制过程，包括以下具体步骤：